COX-2对脂变BRL-3A细胞TG代谢及PPAR-γ、CPT-1基因表达的影响

发布时间：2017-06-25 22:13

  本文关键词：COX-2对脂变BRL-3A细胞TG代谢及PPAR-γ、CPT-1基因表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 研究COX-2沉默与过表达对BRL-3A脂变及脂代谢相关基因PPAR-γ、CPT-1表达的影响。 方法 1、筛选最佳医用脂肪乳浓度，制备肝细胞脂变模型：不同浓度脂肪乳(1%、2%、4%、6%、8%、10%)培养BRL-3A24h后通过油红苏木素染色法观察细胞形态与细胞内脂滴的形成情况、采用ELISA检测细胞内TG含量、MTT检测细胞增殖活性确定诱导细胞脂变的最佳脂肪乳浓度。 2、实验分为正常BRL-3A组、脂变BRL-3A对照组、pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组、pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组、pcDNA3.1(+)-rCOX-2组、pcDNA3.1(+)-HK组、尼美舒利200ug/ml阳性对照组；除正常BRL-3A组外，其他各组均以6%脂肪乳溶液诱导24h，各转染组分别利用lipofectamineTM2000将对应的质粒转染入各组细胞，转染24h后ELISA检测各组细胞内TG含量,了解COX-2沉默或过表达对BRL-3A细胞内TG水平的影响；RT-PCR检测各组细胞COX-2及脂代谢相关基因PPAR-γ、CPT-1mRNA的表达。 结果 1、随脂肪乳浓度增加，油红苏木素染色显示BRL-3A内红色小泡性脂滴增多，ELISA检测显示TG含量增加，MTT检测显示OD值下降。6%脂肪乳溶液诱导后BRL-3A内T G含量较正常肝细胞组明显增加，且细胞存活率大于90%，故将6%确定为实验诱导BRL-3A脂变的最佳脂肪乳浓度。 2、转染后，ELISA检测各组细胞内TG含量，RT-PCR检测各组COX-2、PPAR-γ、CPT-1mRNA的表达： (1)与正常BRL-3A组相比，脂变BRL-3A对照组细胞内TG含量明显增加，COX-2mRNA表达增加，PPAR-γ、CPT-1mRNA表达减少； (2)与脂变BRL-3A对照组相比，，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2shRNA组和尼美舒利200ug/ml阳性对照组细胞内TG含量均减少，COX-2mRNA表达均减少，PPAR-γ、CPT-1mRNA表达均增加，以前者较为明显； (3)与脂变BRL-3A对照组相比，pcDNA3.1(+)-rCOX-2组细胞内TG含量增加，COX-2mRNA表达增加，PPAR-γ、 CPT-1mRNA表达减少； (4)pYr-1.1-hU6-EGFP-HK组、pcDNA3.1(+)-HK组与脂变BRL-3A对照组比较均无统计学意义。 结论 1、6%脂肪乳溶液诱导BRL-3A可成功建立体外肝细胞脂肪变性模型。 2、BRL-3A脂变后，细胞内TG含量增加，COX-2表达升高，脂代谢相关基因PPAR-γ、CPT-1表达降低。 3、COX-2沉默或抑制后，BRL-3A细胞COX-2表达降低，PPAR-γ、CPT-1表达升高，细胞内TG含量减少。 4、COX-2过表达后，BRL-3A细胞COX-2表达升高，PPAR-γ、CPT-1的表达降低，细胞内TG含量增加。
【关键词】：环氧合酶-2 过氧化物酶体增殖物活化受体-γ 肉碱棕榈酰转移酶-1 甘油三酯
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 主要英文缩略语索引5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 实验材料与方法12-25
• 实验结果25-34
• 讨论34-38
• 结论38-39
• 参考文献39-42
• 综述42-49
• 参考文献46-49
• 硕士期间发表的文章49-50
• 致谢50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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1 阳学风;RNAi沉默COX-2对HSC细胞动力学及脂质代谢的影响[D];南华大学;2012年

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本文编号：483774