COX-2过表达载体的构建及其在HSCs中的表达

发布时间：2017-07-14 18:12

  本文关键词：COX-2过表达载体的构建及其在HSCs中的表达

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【摘要】：目的:构建COX-2过表达载体,并转染至HSC-T6中观察其表达情况,为进一步研究COX-2与HSC生物学功能的关系提供前期准备。方法:1.调取COX-2鼠源全长基因,TRIzol法抽提大鼠肝总m RNA,逆转录为c DNA建立文库。2.用RT-PCR扩增得到COX-2目的片段,PCR产物和pc DNA3.1(+)质粒双酶切处理后将COX-2基因片段连接至pc DNA3.1(+)载体上,将构建成的pc DNA3.1(+)-r COX-2转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,在含50μg/ml Kana LB固体平皿上筛选阳性克隆菌株。3.筛选后再对pc DNA3.1(+)-r COX-2进行双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定和测序的分析。4.将构建成功的pc DNA3.1(+)-r COX-2表达载体经脂质体转染入HSC-T6细胞,进行实验分组:HSC-T6细胞组(空白组),pc DNA3.1(+)-r COX-2组(COX-2过表达组);pc DNA3.1(+)组(空载体组)。转染48小时后应用Real-time PCR检测表达载体在HSC-T6中COX-2 m RNA的表达情况。结果:1.RT-PCR产物显示在1800 bp左右出现目的条带。2.将所得的目的基因酶切鉴定及序列分析,测序结果表明和Gen Bank的COX-2基因序列一致,pc DNA3.1(+)-r COX-2表达载体构建成功。3.pc DNA3.1(+)-r COX-2表达载体转染入HSC-T6细胞后显示:COX-2m RNA在pc DNA3.1(+)-r COX-2组中表达明显高于空白组和空载体组,统计学处理有显著意义(P0.01)。结论:1.成功构建了大鼠COX-2过表达载体。2.所构建的pc DNA3.1(+)-r COX-2表达载体可在HSC-T6细胞中获得高表达,为进一步研究COX-2与HSC生物学功能的关系提供了前期准备。
【关键词】：COX-2 过表达 HSCs
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 第1章 绪论11-13
• 第2章 实验材料与方法13-25
• 2.1 实验材料13-15
• 2.2 实验方法15-24
• 2.3 统计学方法24-25
• 第3章 实验结果25-31
• 第4章 讨论31-37
• 第5章 结论37-39
• 参考文献39-43
• 综述43-55
• 参考文献50-55
• 作者攻读学位期间的科研成果55-57
• 致谢57

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本文编号：542110