杏仁核nesfatin-1对大鼠内脏敏感性的影响及可能机制研究

发布时间：2017-07-16 19:09

  本文关键词：杏仁核nesfatin-1对大鼠内脏敏感性的影响及可能机制研究

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【摘要】：【背景】肠易激综合征(Irritable bowel syndrome,IBS)是一种以腹胀、腹痛或腹部不适,伴有排便习惯和粪便性状改变的功能性肠道疾病,经检查可排除引起这些症状的器质性和生化改变。目前,其发病机制尚不完全清楚。内脏高敏感作为IBS的生物学标志近年来受到广泛的关注。研究显示,应激和下丘脑-垂体-肾上腺轴功能失调均参与了内脏高敏感的发生过程。此外,杏仁核作为焦虑和恐惧的调节中枢,其高表达的糖皮质激素受体(GR)和盐皮质激素受体(MR)均已被证实参与了大鼠内脏高敏感的形成过程。Nesfatin-1是2006年由日本学者新发现的一种摄食调节肽,它是由前体物质核组蛋白2(nucleobindin 2,NUCB2)在激素原转化酶的作用下水解而来的一条片段。在中枢,nesfatin-1主要分布于下丘脑视上核(SON)、室旁核(PVN)、孤束核(NTS)、蓝斑(LC)等应激调节有关的核团;此外,在边缘系统的焦虑、恐惧调节中枢杏仁核中也发现有nesfatin-1的表达。Nesfatin-1可激活下丘脑-垂体-肾上腺轴,中枢注射nesfatin-1亦可引起大鼠的焦虑和恐惧行为,但是,目前关于nesfaitn-1对IBS内脏高敏感的关系的研究较少。我们的前期研究发现中枢nesfatin-1可能通过促肾上腺皮质激素释放激素及其受体(CRF-CRFR)途径参与大鼠内脏高敏感的发生。有研究发现,杏仁核内注射皮质酮可通过GR增加CRF的表达。那么杏仁核中的nesfatin-1是否也参与了大鼠内脏高敏感的形成呢?其又是通过什么途径呢?因此,本研究通过采用新生期母婴分离方法来建立大鼠的内脏高敏感模型。初步探讨杏仁核中的nesfatin-1对大鼠内脏敏感性的影响及可能的机制。【研究目的】采用新生期母婴分离方法来建立大鼠的内脏高敏感模型,探讨杏仁核中nesfatin-1是对大鼠内脏高敏感性的形成及可能的机制。【方法】1.内脏高敏感性大鼠模型的建立:新生的雄性SD大鼠随机分成母婴分离组和正常对照组,母婴分离组大鼠从出生后第2-16天,每天上午在8:00-11:00之间,将幼鼠与母鼠分开,其余时间幼鼠与母鼠共笼饲养。对照组大鼠除不与母鼠分离外,其他处理与母婴分离组大鼠一致。观察两组大鼠体质量的变化情况。2.内脏敏感性的检测:通过观察不同压力(20 mm Hg、40 mm Hg、60 mm Hg和80mm Hg)下的结直肠扩张刺激时的腹壁撤退反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)评分和腹外斜肌放电活动(electromyographic,EMG)的肌电图的曲线下面积来评估大鼠的内脏敏感性。3.ELISA法检测大鼠血清nesfatin-1和糖皮质激素(glucocorticoid,GC)的含量,并做二者之间的相关性分析。4.Western-blot和RT-PCR法分别检测母婴分离组和正常对照组大鼠的杏仁核组织中nesfatin-1/NUCB2的蛋白及m RNA表达以及两组大鼠杏仁核中的GR和MR的蛋白及m RNA表达情况。5.将母婴分离组大鼠随机分成2组,分别给予杏仁核内注射抗nesfatin-1/NUCB2抗体或溶剂对照,2h后再次检测该2组大鼠的内脏敏感性的变化。6.取正常大鼠随机分成四组,分别给予杏仁核内注射nesfatin-1、GR拮抗剂(米非司酮)+nesfatin-1、MR受体拮抗剂(安体舒通)+nesfatin-1和溶剂对照,7天后观察四组大鼠在结直肠扩张刺激时的AWR评分和EMG曲线下面积。7.ELISA法检测nesfatin-1组和溶剂对照组大鼠的血清GC的含量。【结果】1.在出生后第20天时,母婴分离组大鼠和正常对照组大鼠之间的体重没有明显差别(P0.05),但是在出生后第8周时,母婴分离组大鼠的体重则要明显低于正常对照大鼠的体重,二者之间的差异有统计学意义(P0.05)。2.母婴分离组大鼠在结直肠扩张压力为40、60和80mm Hg时的AWR评分以及EMG幅值均明显高于对照组(P0.05)。3.ELISA结果显示,母婴分离组大鼠血清nesfatin-1水平明显升高,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。此外,母婴分离大鼠血清GC的含量明显高于正常组大鼠(P0.05)。4.母婴分离大鼠血清nesfatin-1水平与血清GC水平呈正相关关系;并且血清nesfatin-1水平与结直肠扩张刺激时的各个压力下的AWR评分和EMG曲线下面积均呈正相关关系。5.母婴分离组大鼠杏仁核中nesfatin-1/NUCB2的蛋白表达水平及m RNA的表达水平均明显高于对照组大鼠,两组之间差异有统计学意义(P0.05)。6.与正常对照组大鼠相比,母婴分离组大鼠杏仁核中的GR和MR的蛋白水平及m RNA水平的表达无明显改变,差异无统计学意义。7.母婴分离大鼠杏仁核内注射抗nesfatin-1/NUCB2抗体后,与注射溶剂对照相比,模型大鼠在结直肠扩张刺激的各个压力下的AWR评分和EMG曲线下面积均明显降低(P0.05)。8.给予正常大鼠杏仁核内注射nesfatin-1一周以后,大鼠的AWR评分和EMG曲线下面积在结直肠扩张压力为20、40、60和80mm Hg时明显高于溶剂组(P0.05);而注射米非司酮+nesfatin-1组和安体舒通+nesfatin-1组的大鼠的AWR评分和EMG曲线下面积在各个扩张压力下与注射溶剂组相比均无明显差异。9.与溶剂对照组相比,杏仁核内注射nesfatin-1组的大鼠血清GC水平明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。【结论】杏仁核内的nesfatin-1可能与大鼠内脏高敏感的发生有关,其可能通过增加血浆GC的含量,进而通过杏仁核中糖皮质激素受体GR或盐皮质激素受体MR途径实现的。
【关键词】：肠易激综合征 内脏高敏感 nesfatin-1 杏仁核 糖皮质激素受体 盐皮质激素受体
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574.4
【目录】：

• 中英文对照及缩略词表(Abbreviations)5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-18
• 材料18-25
• 方法25-37
• 结果37-50
• 讨论50-54
• 结论54-55
• 参考文献55-62
• 综述62-75
• 参考文献69-75
• 攻读学位期间发表文章情况75-76
• 致谢76

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