肝纤维化大鼠血液微环境对人脐带MSCs向肝细胞分化的影响及机制研究

发布时间：2017-07-30 01:22

  本文关键词：肝纤维化大鼠血液微环境对人脐带MSCs向肝细胞分化的影响及机制研究

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【摘要】：目的探讨肝纤维化大鼠血液微环境对人脐带MSCs(human umbilical cord MSCs,HUCMSCs)向肝细胞分化的影响及作用机制。方法取成年清洁级雄性SD大鼠18只,体质量(200±20)g;其中12只采用腹腔注射硫代乙酰胺方法制备肝纤维化模型,组织学观察确定模型制备成功后取大鼠全血分离血清;剩余6只正常大鼠同法分离血清。ELISA法检测血清中EGF、b FGF、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、抑瘤素(oncostatin M,OSM)含量。取第3代HUCMSCs分组培养7 d,其中肝纤维化血清组(A组)、正常血清组(B组)分别以含5 m L/L肝纤维化大鼠血清、正常大鼠血清的DMEM/F12培养基(含10%FBS)培养;对照组(C组)以DMEM/F12培养基(含10%FBS)培养。培养期间采用倒置显微镜观察细胞形态变化;7 d后取各组细胞行免疫荧光检测肝细胞表面标志物甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)、细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)表达,Western blot检测肝细胞功能蛋白白蛋白(albumin,ALB)、色氨酸2,3-双加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,TPH2)、CYP3A4及MAPK/ERK信号通路蛋白(P-ERK)表达,二乙酰肟法测定细胞上清液中尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量。结果组织学观察示大鼠肝组织符合纤维化改变,模型制备成功。正常大鼠血清中EGF、OSM含量均高于纤维化大鼠,差异有统计学意义(t=14.989,P=0.000;t=37.172,P=0.000);肝纤维化大鼠血清中HGF含量为(1.03±0.12)ng/m L,正常大鼠血清中未检出;两种血清中均未检出b FGF。诱导培养后,倒置显微镜下观察各组细胞形态均未见明显变化且组间无明显差异。培养7 d时,A组细胞可见AFP、CK18绿色荧光,B、C组染色均为阴性。Western blot检测示A组细胞可表达肝细胞功能蛋白ALB、TPH2及CYP3A4,B、C组均未见上述蛋白表达。各组细胞均可表达P-ERK,其中A组P-ERK蛋白相对表达量显著高于B、C组(P0.05);B、C组间比较差异无统计学意义(P0.05)。A组细胞上清液中BUN含量亦显著高于B、C组(P0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论在肝纤维化条件下,大鼠血液中的HGF水平升高、EGF、OSM水平降低,形成的血液微环境会激活HUCMSCs的MAPK/ERK信号通路,使其向肝细胞分化。
【作者单位】： 解放军医学院;解放军白求恩国际和平医院药剂科;
【关键词】： 肝纤维化 人脐带MSCs 细胞分化 血清 大鼠
【基金】：军队“十二五”重点课题资助项目(BWS11J002)~~
【分类号】：R575.2
【正文快照】： 目前,肝纤维化发病率和死亡率较高,已成为重要公共卫生问题,药物治疗效果不佳[1-2]。近年来以干细胞技术为代表的再生医学,为肝纤维化的治疗提供了新选择[3-4]。人脐带MSCs(human umbilicalcord MSCs,HUCMSCs)无伦理道德争议,是具有应用前景的组织工程种子细胞。研究显示,HUCM

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本文编号：591961