新基因GDDR在小鼠急慢性胃粘膜损伤中的作用

发布时间：2017-08-09 22:28

  本文关键词：新基因GDDR在小鼠急慢性胃粘膜损伤中的作用

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【摘要】：背景:基因GDDR(Gastric Drastic Down-Related gene)由本研究组发现并成功将其从体外克隆,它能编码大小为18.3 k Da的蛋白。我们先前的研究工作显示GDDR在正常胃粘膜表层上皮小凹细胞表达丰度高。三叶草因子家族TFF是存在于胃粘膜中含量较为丰富的蛋白,由胃粘膜细胞合成并分泌。TFF1和TFF2是其家族的主要成员,他们可通过调节胃粘膜上皮细胞之间的粘附,增加细胞迁移,增加粘蛋白以及减少胃酸的分泌,调节上皮细胞增值、分化以及凋亡等多种方式来扮演着胃粘膜修复和保护的角色。相关研究显示,GDDR特异性结合TFF1和TFF2形成的异源二聚体在正常胃粘膜上皮特异表达并共同发挥着保护胃粘膜的作用。我们据此推测GDDR也可能在胃粘膜中起着重要作用,且可能与TFF家族有着密切联系。本研究将初步探索GDDR在急慢性胃粘膜损伤中的作用。目的:1.对GDDR基因敲除小鼠进行全方位鉴定。2.建立小鼠急性胃损伤模型,探究GDDR在急性胃粘膜损伤中的作用。3.初步探讨GDDR在小鼠急性胃粘膜损伤中发挥作用所涉及的相关机制。4.建立小鼠慢性胃损伤模型,研究GDDR在慢性胃粘膜损伤中的作用。方法:1.从基因组DNA水平、m RNA转录再到蛋白表达水平以及组织定位水平对GDDR基因敲除小鼠进行全方位鉴定。2.利用水浸法应激性小鼠胃溃疡来建立GDDR-/-和GDDR+/+小鼠急性胃损伤模型,从胃组织大体标本、HE染色和电镜等不同层面观察两种小鼠胃粘膜损伤情况,利用血常规和检测髓过氧化物酶(MPO)活性来分析中性粒细胞数量和活性来初步探究GDDR在急性胃损伤中发挥的作用。3.通过实时定量PCR筛选小鼠急性胃粘膜损伤中涉及的相关炎症分子和胃粘膜防御相关分子,并用ELISA、免疫组化方法进行验证。利用western blot来初步探索其中涉及的信号通路。4.采用Hp感染小鼠胃粘膜来建立上述两种小鼠的慢性胃损伤模型,从胃组织大体标本和HE染色镜下观察胃粘膜损伤情况,初步探究GDDR在慢性胃损伤中发挥的作用。结果:1.GDDR-/-型小鼠从基因组DNA水平、m RNA转录到蛋白表达水平以及组织定位水平检测发现无GDDR的表达,而对应的GDDR+/+小鼠组织中GDDR表达正常。2.GDDR+/+小鼠急性胃黏膜损伤程度明显重于GDDR-/-型,血液中的中性粒细胞数和胃组织的MPO活性均高于GDDR-/-组和对照组。3.实时定量PCR结果显示GDDR+/+小鼠胃组织趋化因子CXCL2和炎症分子IL-6的表达明显高于GDDR-/-组和同期对照组,ELISA和免疫组织化学结果与上述结果相一致。Western blot结果提示GDDR+/+急性胃损伤组小鼠的磷酸化STAT3的表达量明显强于GDDR-/-组。4.胃组织大体标本、HE染色结果初步表明:GDDR-/-小鼠慢性胃损伤程度重于GDDR+/+组和同期对照组。结论:1.GDDR基因敲除小鼠构建成功。2.新基因GDDR可能通过增加CXCL2和IL-6的表达,激活STAT3炎症信号通路促进细胞凋亡从而加重小鼠急性应激性胃粘膜损伤。3.新基因GDDR可能减轻由HP感染引起的小鼠慢性胃粘膜损伤,具体机制有待进一步研究。
【关键词】：GDDR 水浸应激 慢性胃损伤 IL-6/STAT3
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R573
【目录】：

• 缩略语表7-9
• 中文摘要9-12
• ABSTRACT12-15
• 前言15-16
• 文献回顾16-27
• 第一部分GDDR基因敲除（GDDR-/-）小鼠的鉴定27-38
• 1 材料27-28
• 1.1 实验动物27
• 1.2 主要试剂27-28
• 1.3 主要抗体28
• 1.4 主要仪器28
• 2 方法28-34
• 2.1 基因组DNA鉴定28-30
• 2.2 转录m RNA鉴定30-32
• 2.3 western blot鉴定32-33
• 2.4 免疫组织化学染色鉴定33-34
• 2.5 统计学分析34
• 3 结果34-37
• 3.1 基因组DNA鉴定34-35
• 3.2 转录m RNA鉴定35-36
• 3.3 western blot鉴定36
• 3.4 免疫组织化学染色鉴定36-37
• 4 讨论37-38
• 第二部分GDDR在急性胃损伤中的作用研究38-50
• 1 材料38-39
• 1.1 实验动物38
• 1.2 主要试剂38-39
• 1.3 主要仪器39
• 2 方法39-42
• 2.1 建立小鼠急性胃损伤模型39-40
• 2.2 HE染色40
• 2.3 电镜下观察胃粘膜损伤情况40-41
• 2.4 两种小鼠造模前后胃粘膜组织MPO的检测41
• 2.5 血涂片瑞氏染色41
• 2.6 小鼠血常规检测中性粒细胞含量41
• 2.7 TUNEL实验检测胃粘膜细胞凋亡情况41-42
• 2.8 统计学分析42
• 3 结果42-49
• 3.1 肉眼观察两种小鼠急性应激后胃粘膜损伤情况42-44
• 3.2 HE染色后显微镜下观察两种小鼠造模后胃粘膜损伤情况44
• 3.3 电镜观察两种小鼠胃粘膜损伤情况44-45
• 3.4 两种小鼠造模前后MPO的活性测定45
• 3.5 检测两种小鼠在WIR前后血液中中性粒细胞数目45-47
• 3.6 TUNEL实验检测胃粘膜细胞凋亡情况47-49
• 4 讨论49-50
• 第三部分 初步探究GDDR在急性胃损伤中的机制50-61
• 1 材料50-51
• 1.1 实验动物50
• 1.2 主要试剂50-51
• 1.3 主要仪器51
• 2 方法51-56
• 2.1 实时定量PCR筛选促炎因子及相关保护分子51-55
• 2.2 免疫组织化学染色检测小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的表达55
• 2.3 ELISA实验检测小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的含量55
• 2.4 western blot检测两种小鼠胃粘膜STAT3及p-STAT3的表达55-56
• 2.5 统计学分析56
• 3 结果56-59
• 3.1 实时定量PCR筛选促炎因子及胃粘膜相关分子56-57
• 3.2 免疫组织化学染色检测小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的表达57-58
• 3.3 ELISA法检测小鼠胃粘膜CXCL2和IL-6 的含量58
• 3.4 western blot检测两种小鼠胃粘膜STAT3及p-STAT3的表达58-59
• 4 讨论59-61
• 第四部分GDDR在小鼠慢性胃粘膜损伤中的作用61-70
• 1 材料61-62
• 1.1 实验动物61
• 1.2 幽门螺旋杆菌61
• 1.3 主要试剂61-62
• 1.4 主要仪器62
• 2 方法62-64
• 2.1 Hp的培养62
• 2.2 Hp的染色鉴定62-63
• 2.3 建立Hp感染小鼠胃粘膜慢性损伤模型63
• 2.4 Hp感染小鼠胃粘膜模型的鉴定63-64
• 2.5 统计学分析64
• 3 结果64-67
• 3.1 Hp染色鉴定64-65
• 3.2 大体标本观察65-66
• 3.3 微需氧细菌培养66
• 3.4 快速尿素酶实验66-67
• 3.5 HE染色67
• 4 讨论67-70
• 小结70-71
• 参考文献71-78
• 个人简历和研究成果78-79
• 致谢79

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 杜建军,窦科峰,彭淑牖,李江涛,刘颖斌,王为忠,管文贤,高志清;胃癌相关新基因GDDR的研究[J];中华外科杂志;2005年01期

2 谷满仓;刘俊莹;钱亚芳;陈眉;;抗肿瘤天然药物抑制STAT3信号通路的分子机制研究进展[J];药学进展;2014年08期

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本文编号：647658