肝豆扶木汤对Wilson病肝纤维化临床疗效观察及其对TX小鼠肝纤维化的Western blot研究

发布时间：2017-08-18 13:48

  本文关键词：肝豆扶木汤对Wilson病肝纤维化临床疗效观察及其对TX小鼠肝纤维化的Western blot研究

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【摘要】：目的:(1)对肝豆状核变性(WD)患者采用不同的治疗方案,观察肝豆扶木汤(GDFMT)对WD肝纤维化患者中医证候积分值、肝纤维化血清学指标、肝功能、血清铜蓝蛋白、铜氧化酶、血清铜及24h尿铜等的影响,评价GDFMT治疗WD肝纤维化患者的临床疗效,探讨GDFMT治疗WD肝纤维化的作用机理;(2)采用Western blot法观察GDFMT在不同药物浓度、不同治疗时间对WD模型TX小鼠肝纤维化的干预作用,证实GDFMT对WD模型TX小鼠肝纤维化具有逆转作用,阐明GDFMT对WD模型TX小鼠肝纤维化逆转作用的分子机制;为提供逆转WD肝纤维化有效组方。方法:临床部分:将符合纳入标准的60例WD肝纤维化患者随机分为治疗组(GDFMT组)30例,对照组(扶正化瘀胶囊组)30例。治疗组予以GDFMT,对照组予以扶正化瘀胶囊,基础治疗2组均予以DMPS驱铜治疗,6天予以静脉排铜,间歇2天予以补钙,1疗程为8天,共计4疗程。对比WD患者治疗前后中医证候积分值、肝纤维化血清学指标(血清HA、LN、PC-Ⅲ、C-IV)、肝功能(ALT、AST、TP、ALB)、血清铜、血清铜蓝蛋白、血清铜氧化酶及24h尿铜等指标变化。实验部分:144只TX小鼠随机分为模型组、青霉胺组、丹参组、GDFMT低剂量组、GDFMT中剂量组、GDFMT高剂量组。正常对照组DL小鼠24只。共7组。(1)采用竞争性放免分析法检测血清HA、LN、PC-Ⅲ、C-IV含量;(2)采用赖氏法检测血清ALT、AST,考马斯亮兰法检测血清TP、溴甲酚绿法检测血清ALB;(3)采用Western blot法检测肝组织TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2、smad3、smad4、smad7蛋白的含量。结果:(1)临床部分:1)临床总疗效:经过4个疗程的治疗,治疗组dmps联合gdfmt临床总疗效明显优于对照组dmps加扶正化瘀胶囊组。2)中医证候积分值:两组患者在治疗前中医证候积分值无差异(p0.05);与同组治疗前相比,2组治疗后中医证候积分值均降低,具有统计学意义(p0.01,p0.05);2组治疗后组间对比,治疗组积分值改善较对照组更明显(p0.01)。3)血清ha、ln、pc-Ⅲ、c-iv:治疗前,2组ha、ln、c-iv、pc-Ⅲ值均无显著差异(p0.05);治疗后组内比较,治疗组较治疗前ha、ln、c-iv、pc-Ⅲ均显著降低(p0.01),对照组较治疗前有下降,且有统计学意义(p0.01,p0.05);治疗后组间比较,治疗组比对照组改善更加明显,两组比较差异有统计学意义(p0.01)。说明肝豆扶木汤具有良好的抗肝纤维化作用。4)肝功能:2组治疗前血清alt、ast、tp、alb值均差异无统计学意义(p0.05);治疗后治疗组患者血清alt、ast显著下降,tp、alb显著升高,表明治疗组治疗后肝功能指标较治疗前显著改善,有统计学意义(p0.01);对照组肝功能指标亦较治疗前有所改善,差异有统计学意义(p0.05);2组治疗后组间比较,治疗组肝功能指标(alt、ast、tp、alb)改善情况较对照组更为明显,差异有统计学意义(p0.01)。5)血清铜蓝蛋白、铜氧化酶及血清铜:与同组治疗前比较,治疗组和对照组血清铜蓝蛋白、铜氧化酶及血清铜治疗后均无显著差异(p0.05);治疗后组间比较,2组均无显著差异(p0.05),表明肝豆扶木汤对wd患者上述三项指标均无明显影响。6)24h尿铜:与同组治疗前比较,2组治疗后24h尿铜均显著升高,差异有显著统计学意义(p0.01);治疗后组间比较,每疗程末治疗组24h尿铜均明显高于对应的对照组(p0.01)。提示肝豆扶木汤能显著提高wd患者的排铜量。7)心电图、血常规、尿常规、大便常规及肾功能:2组wd患者治疗前后心电图、血常规、尿常规、大便常规及肾功能未见明显异常变化。(2)实验部分:1)血清ha、ln、pc-Ⅲ、c-iv含量:(1)与对应的正常组2周、4周、6周组比较,模型组tx小鼠血清ha、ln、pcⅢ、c-iv含量明显升高(p0.01),提示wd模型tx小鼠存在明显肝脏损害。(2)与对应的模型组2周、4周、6周比较,gdfmt高、中剂量组、丹参组和青霉胺组各组ha、ln、pc-Ⅲ、c-iv均明显下降(p0.05,p0.01),gdfmt2周血清ha、ln、pc-Ⅲ、c-iv虽均有下降,但差异无统计学意义(p0.05)。(3)与对应的丹参组2周、4周、6周各组比较,gdfmt高、低剂量组各组血清ha、ln、pc-Ⅲ、c-iv与丹参组各组比较差异有统计学意义(p0.05,p0.01);gdfmt中剂量组各组与丹参组各组差异无统计学意义(p0.05)。(4)与青霉胺组2周、4周、6周比较,gdfmt高、中剂量组各组较对应的青霉胺组ha、ln、pc-Ⅲ、c-iv明显降低(p0.05,p0.01)。(5)gdfmt高剂量组2周、4周、6周组与对应的中、低剂量组各组之间两两比较,差异有统计学意义(p0.05,p0.01)。(6)对应的gdfmt2周高、中、低剂量组比较,4周各组血清ha、ln、pc-Ⅲ、c-iv均明显降低(p0.05)。(7)与对应的gdfmt4周高、中、低剂量各组比较,6周各组血清ha、ln、pc-Ⅲ、c-iv均显著降低(p0.05)。2)血清ast、alt活力:(1)与对应的正常组2周、4周、6周组比较,模型组tx小鼠血清alt、ast活力明显升高(p0.01),提示wd模型tx小鼠存在明显肝脏损害。(2)与对应的模型组2周、4周、6周比较,gdfmt高、中、低剂量组、丹参组和青霉胺组各组alt、ast均下降(p0.05,p0.01)。(3)与对应的丹参组2周、4周、6周比较,gdfmt高剂量组各组血清alt、ast活力均较对应的丹参组明显降低(p0.05);gdfmt中剂量组各组与对应的丹参组各组比较差异无统计学意义(p0.05)。(4)与对应的青霉胺组2周、4周、6周比较,gdfmt高、中剂量组各组与青霉胺组各组比较差异有统计学意义(p0.05,p0.01);gdfmt低剂量组各组与对应的青霉胺组各组比较差异无统计学意义(p0.05)。(5)gdfmt高剂量组2周、4周、6周组与对应的中剂量组和低剂量组各组之间两两比较,差异有统计学意义(p0.01,p0.05)。(6)与对应的gdfmt2周高、中、低剂量组比较,gdfmt4周各组血清alt、ast活力虽均有不同程度下降,但差异无统计学意义(p0.05)。(7)与对应的gdfmt4周高、中、低剂量组比较,gdfmt6周各组血清alt、ast活力均明显降低(p0.05)。3)血清tp、alb含量:(1)与对应的正常组2周、4周、6周组比较,模型组tx小鼠血清tp、alb含量明显降低(p0.01),提示wd模型tx小鼠肝脏合成蛋白能力下降,存在明显肝脏损害现象。(2)与对应的模型组2周、4周、6周比较,gdfmt高、中剂量组和丹参组各组tp、alb含量均明显升高(p0.01),gdfmt低剂量组与青霉胺组2周的tp、alb含量虽有升高,但无统计学意义(p0.05)。(3)与对应的丹参组2周、4周、6周比较,gdfmt高剂量组各组血清tp、alb含量均较对应的丹参组各组明显升高(p0.01);gdfmt中剂量组各组与对应的丹参组各组比较差异无统计学意义(p0.05)。(4)与对应的青霉胺组2周、4周、6周比较,gdfmt高剂量组、中剂量组2周、4周、6周较对应的青霉胺组tp、alb含量均明显增高(p0.01,p0.05)。(5)gdfmt高剂量组与中剂量组、低剂量组之间两两比较,差异有统计学意义(p0.01,p0.05)。(6)与对应的gdfmt2周高、中、低剂量组比较,gdfmt4周各组血清tp、alb含量均显著升高(p0.05)。(7)与对应的gdfmt4周高、中、低剂量组比较,gdfmt6周各组血清tp、alb含量均显著升高(p0.05)。4)tgf-β1、tβrⅠ、tβrⅡ、smad2、smad3、smad4、smad7蛋白表达:(1)与对应的正常组2周、4周、6周比较,模型组各组的tgf-β1、tβrⅠ、tβrⅡ、smad2、smad3、smad4蛋白表达明显升高,smad7蛋白表达明显降低(p0.01),提示wd模型tx小鼠存在明显肝纤维化。(2)与对应的模型组2周、4周、6周比较,gdfmt高、中、低剂量组、丹参组和青霉胺组各组tgf-β1、tβrⅠ、tβrⅡ、smad2、smad3、smad4蛋白表达均减少,smad7蛋白表达则升高,差异有统计学意义(p0.05,p0.01)。(3)丹参组2周、4周、6周与对应的gdfmt高、低剂量组各组比较,差异有统计学意义(p0.01);丹参组2周、4周、6周与对应的gdfmt中剂量组比较,差异无统计学意义(p0.05)。(4)青霉胺组2周、4周、6周与对应的gdfmt高、中剂量组比较差异有统计学意义(p0.05,p0.01);青霉胺组2周、4周、6周与对应的gdfmt低剂量组比较差异无统计学意义(p0.05)。(5)gdfmt高剂量组2周、4周、6周与对应的gdfmt中、低剂量组各组之间两两比较差异有统计学意义(p0.05,p0.01)。(6)与对应的gdfmt2周高、中、低剂量组比较,tgf-β1、tβrⅠ、tβrⅡ、smad2、smad3、smad4在gdfmt4周各组蛋白表达均明显降低,smad7蛋白表达则明显升高(p0.05,p0.01)。(7)与对应的gdfmt4周高、中、低剂量组比较,TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2、Smad3、Smad4在GDFMT 6周各组蛋白表达均明显降低,Smad7蛋白表达则明显升高(P0.05,P0.01)。结论:(1)GDFMT能够有效地改善WD肝纤维化患者的临床症状和体征,改善肝功能(ALT、AST、TP、ALB),增加24h尿铜的排泄。(2)GDFMT能够有效地降低WD肝纤维化患者血清肝纤维化四项指标(HA、LN、PC-III、C-IV),从而发挥抗纤维化的作用。(3)GDFMT能够有效地改善WD模型TX小鼠的肝功能;且能降低TX小鼠肝纤维化血清学指标(HA、LN、PC-III、C-IV),说明GDFMT具有良好的抗肝纤维化的作用;且呈量效-时效依赖性。(4)GDFMT能够调控TGF-β1及Smads蛋白表达,从而抑制TGF-β1/Smad信号传导的激活,阻止了肝纤维化的发生与发展,且对TGF-β1/Smad信号传导的调控呈量效-时效依赖性。
【关键词】：肝豆扶木汤 肝豆状核变性 肝纤维化 TX小鼠 Western blot TGF-β1/Smad信号转导通路
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.2;R742.4
【目录】：

• 中文摘要5-10
• 英文摘要10-18
• 英文缩略词18-19
• 前言19-22
• 第一部分 肝豆扶木汤对Wilson病肝纤维化临床疗效观察22-44
• 1 资料和方法22-23
• 2 治疗方案23-24
• 3 指标观测24-25
• 4 结果25-33
• 5 讨论33-44
• 第二部分 肝豆扶木汤对TX小鼠肝纤维化的Western blot研究44-79
• 1 实验材料44-47
• 2 实验方法47-49
• 3 实验结果49-73
• 4 讨论73-79
• 结论79-80
• 参考文献80-88
• 综述88-101
• 参考文献96-101
• 附表101-104
• 个人简介104-105
• 致谢105

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本文编号：694927