JAZF1在非酒精性脂肪肝形成与发展中的作用机制研究

发布时间：2017-08-20 21:41

  本文关键词：JAZF1在非酒精性脂肪肝形成与发展中的作用机制研究

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【摘要】：第一部分JAZF1抵抗老龄化诱导的NAFLD的形成目的:探讨JAZF1基因过表达在老龄化诱导的NAFLD形成中的作用。方法:15只8周龄的JAZF1转基因小鼠(JAZF1-Tg鼠)和15只同年龄匹配的C57BL/6J小鼠(WT鼠)普食喂养3个时间段(3个月,6个月,12个月),每个时间点随机抽取JAZF1-Tg和WT鼠各5只,检测随着年龄的增长各组小鼠的基础生理代谢指标以及肝脏中涉及脂肪酸从头合成和氧化相关基因的m RNA及蛋白水平。结果:随着年龄的增长,WT鼠肝细胞内甘油三酯累积明显增多(P0.05);与同龄的WT鼠比较,JAZF1-Tg鼠肝细胞内甘油三酯含量明显减少(P0.05);与同龄的WT鼠比较,喂养12个月后的JAZF1-Tg鼠血TG、TC含量明显减少(P0.05);基因m RNA水平检测显示,与同龄WT鼠比较,喂养6个月和12个月后的JAZF1-Tg鼠肝脏中脂肪酸从头合成相关基因(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)表达明显下调(P0.05),而与脂肪酸氧化相关的基因((PPAR-α,CPT-1)表达变化不明显(p0.05);随着年龄的增长,JAZF1基因的m RNA和蛋白水平表达明显下调(P0.05),而SREBP-1c基因的m RNA和蛋白水平表达明显上调(P0.05)。结论:随着年龄的增长,肝脏中JAZF1基因表达下调,JAZF1过表达可抵抗老龄化诱导的NAFLD的形成。第二部分JAZF1改善高脂喂养诱导的NAFLD的形成与发展目的:探讨JAZF1在高脂喂养诱导的NAFLD的形成与发展中的作用及相关分子机制。方法:30只8周龄的JAZF1-Tg鼠和30只WT鼠分别随机分为2组:普食喂养组(n=15)和高脂喂养组(n=15),各组小鼠喂养3个时间段(3个月,6个月,12个月),每个时间点随机抽取高脂和普食喂养的JAZF1-Tg和WT鼠各5只。检测各时间段小鼠的基础生理代谢指标以及肝脏中涉及脂肪酸从头合成与氧化相关基因的m RNA及蛋白水平。分析每个喂养阶段小鼠肝脏中AMPK/ACC信号变化情况。结果:HE染色结果显示,随着喂养时间的延长,高脂喂养的WT鼠肝脏中脂肪变性程度逐渐加重,由最初少量肉眼可见的脂滴沉积,到弥漫性的脂肪变性,甚至高脂12个月的时候出现了大泡性脂肪变性以及炎症细胞的浸润。但是,与同阶段高脂喂养WT鼠比较,JAZF1-Tg鼠的基础代谢指标和肝脏中的TG,TC含量,以及组织学HE染色和油红O染色结果均明显改善。基因检测显示,与同阶段喂养的高脂WT鼠比较,JAZF1-Tg鼠肝脏中脂肪从头合成相关基因的m RNA(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)明显下调,相关蛋白SREBP-1和FAS表达也呈现明显下调(P0.05),而与脂肪酸氧化相关基因的m RNA(PPAR-α,CPT-1)表达变化不明显(p0.05);且在高脂喂养3个月和6个月时,与WT鼠比较,JAZF1-Tg鼠肝脏AMPK信号检测显示,AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明显增加(P0.05)。结论:JAZF1过表达主要通过减少脂肪的从头合成,改善高脂喂养诱导的NAFLD的形成与发展。第三部分JAZF1减少脂肪酸诱导的肝细胞内脂质累积及相关机制研究目的:探讨JAZF1在脂肪酸诱导的肝细胞脂肪变性中的作用及相关分子机制。方法:在小鼠的原代肝细胞(PMH细胞)以及人Hep G2肝癌细胞中,利用1m M的FFAs(OA:PA=2:1的比例)诱导肝脂肪变性细胞模型,同时,利用JAZF1过表达病毒(Ad-JAZF1)和JAZF1的抑制病毒(sh JAZF1)分别过表达和抑制JAZF1的表达,探讨JAZF1基因在FFAs诱导的肝细胞脂质累积中的作用,检测脂肪酸从头合成相关基因(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)的m RNA及相关蛋白的表达,分析肝细胞中AMPK/ACC信号变化情况。同时,构建SREBP-1c基因启动子,双荧光素酶报告基因分析JAZF1基因对SREBP-1c基因启动子的调控作用。结果:在小鼠的PMH和人Hep G2肝癌细胞中,均成功诱导了肝脂肪变性细胞模型。在两种肝脂肪变性细胞中,JAZF1过表达减少FFAs诱导的PMH和Hep G2细胞内脂滴的累积,与Ad-GFP组比较,Ad-JAZF1组在FFAs诱导的脂肪变性肝细胞中脂肪酸从头合成基因的m RNA(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)和相关蛋白(SREBP-1,FAS)表达明显下调(P0.05);JAZF1抑制增多FFAs诱导的PMH和Hep G2细胞内脂滴的累积,与HK组比较,sh JAZF1组在FFAs诱导的两种脂肪变性肝细胞中脂肪酸从头合成相关基因的m RNA(SREBP-1c,SCD-1,FAS,ACC-1)和相关蛋白(SREBP-1,FAS)表达明显上调(P0.05);与Ad-GFP组比较,Ad-JAZF1组在FFAs诱导的两种脂肪变性肝细胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明显增加;与HK组比较,sh JAZF1组在FFAs诱导的Hep G2脂肪变性肝细胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明显下降,在PMH脂肪变性肝细胞中,AMPK的磷酸化虽下降趋势不明显,但是ACC的磷酸化下降有明显差异(P0.05);双荧光素酶报告基因分析JAZF1基因在基础状态下对SREBP-1c基因启动子无明显调控作用(p0.05),但是在胰岛素刺激下,JAZF1基因可显著下调胰岛素诱导的SREBP-1c基因启动子的活性(p0.05)。结论:JAZF1激活AMPK信号,减少肝细胞内脂肪的从头合成,改善脂肪酸诱导的肝细胞内甘油三酯的累积。同时,在胰岛素的刺激下,JAZF1过表达可抑制胰岛素诱导的SREBP-1c启动子活性。
【关键词】：NAFLD JAZF1 SREBP-1c 老龄化 NAFLD JAZF1 SREBP-1 AMPK NAFLD JAZF1 SREBP-1 AMPK
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-7
• 中文摘要7-13
• 英文摘要13-20
• 引言20-23
• 第一部分 JAZF1抵抗老龄化诱导的NAFLD的形成23-43
• 1 实验材料23-26
• 2 实验方法26-34
• 3 结果34-40
• 4 讨论40-43
• 第二部分 JAZF1改善高脂喂养诱导的NAFLD的形成与发展43-59
• 1 实验材料43-44
• 2 实验方法44
• 3 结果44-57
• 4 讨论57-59
• 第三部分 JAZF1减少脂肪酸诱导的肝细胞内脂质累积及相关机制研究59-84
• 1 实验材料59-62
• 2 实验方法62-68
• 3 结果68-81
• 4 讨论81-84
• 全文总结84-86
• 课题的创新点与局限性86-87
• 参考文献87-95
• 文献综述95-109
• 参考文献101-109
• 致谢109-110
• 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录110

【参考文献】

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1 Monjur Ahmed;;Non-alcoholic fatty liver disease in 2015[J];World Journal of Hepatology;2015年11期

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本文编号：709067