Erbin在TGF-β信号通路介导的胰腺星状细胞（PSC）EMT改变中的表达

发布时间：2017-08-23 17:06

  本文关键词：Erbin在TGF-β信号通路介导的胰腺星状细胞（PSC）EMT改变中的表达

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【摘要】：第一部分组织块法分离培养小鼠PSC目的:利用组织块法分离培养CP模型组和对照组PSC,并分析两组分选细胞的差异。方法:雨蛙素诱导制备小鼠CP模型,HE染色观察胰腺纤维化改变;取CP组和对照组小鼠胰腺组织,胎牛血清清洗,剪切至小米粒大小贴壁培养,观察两组细胞及传代前后细胞形态学差异,采用油红O染色鉴定静息态PSC,免疫细胞化学/荧光法标记α-SMA和Desmin,荧光定量PCR对比静息和活化PSCα-SMA和Desmin的m RNA表达量;利用免疫细胞化学/荧光法标记胰腺导管细胞标志物CK19和SOX9,及腺泡细胞标志物Chymotrypsin和Amylase。结果:(1)HE染色:造模组胰腺发生纤维化改变,腺泡细胞导管化;(2)形态学观察:贴壁4天细胞多呈类圆形或星形,核周环绕脂滴,传代细胞体积增大,立体感消失,呈“星芒状”,脂滴消失,CP组细胞形态体积小于对照组;(3)油红O染色:CP组和对照组早期细胞均染色,传代细胞未着色;(4)免疫细胞化学/荧光:两组细胞传代后,α-SMA和Desmin标记均阳性,CK19、SOX9、Chymotrypsin、Amylase标记均阴性;(5)荧光定量PCR:对照组传代细胞和CP组细胞α-SMA m RNA含量明显高于对照组早期细胞。结论:组织块法可成功分选CP模型组和对照组PSC,且两组贴壁早期细胞均为静息状态。第二部分Erbin及TGF-β1在CP模型组和对照组PSC中的表达差异目的:探讨Erbin及TGF-β1在CP模型组和对照组PSC中的表达差异方法:采用雨蛙素腹腔注射法制备CP模型鼠,组织块法分离提取PSC,运用荧光定量PCR和Western blot技术比较CP组和对照组PSC中Erbin及TGF-β1m RNA和蛋白表达量的差异。结果:(1)CP组Erbin表达较对照组显著升高,其转录水平为对照组的6.36倍,蛋白水平为对照组的6.79倍,P0.05;(2)TGF-β1在CP组中的表达明显高于对照组,其m RNA和蛋白分别为对照组的3.99倍和1.43倍,P0.05.结论:Erbin和TGF-β1在胰腺纤维化过程中呈一致性升高,Erbin可能通过调控TGF-β1通路参与胰腺纤维化的发生。第三部分Erbin在TGF-β1诱导的EMT过程中的表达目的:探讨TGF-β1诱导PSC活化过程中是否发生EMT样改变及Erbin和TGF-β信号通路在PSC发生EMT过程中的表达变化。方法:用10ng/ml TGF-β1刺激贴壁第4天PSC 48h,观察细胞形态改变,并采用荧光定量PCR和Western blot技术检测TGF-β1处理前后细胞E-cadherin、α-SMA、Erbin及TGF-β信号通路靶点分子的表达变化。结果:(1)TGF-β1处理过的PSC体积增大,立体感消失,脂滴减少、消失;(2)TGF-β1处理的细胞E-cadherin m RNA(0.33:1)和蛋白(0.07:1)表达均下调(P0.05),α-SMA m RNA(2.91:1)和蛋白(3.40:1)表达均上调(P0.05);(3)荧光定量PCR结果示,TGF-β1处理细胞Erbin(13.03倍)、TGF-β1(2.94倍)及其下游的Smad 3(2.08倍)和ERK(2.99倍)m RNA均表达增加(P0.05);(4)Western blot结果示,TGF-β1处理的细胞Erbin、TGF-β1、Smad 3及ERK蛋白表达均升高,分别为未处理细胞的2.28倍、1.30倍、3.15倍及1.73倍(P0.05)。结论:PSC活化过程发生EMT样改变,并上调Erbin、TGF-β/Smad通路及ERK通路靶点分子表达,参与胰腺纤维化的形成。
【关键词】：组织块法 胰腺星状细胞(PSC) 分离 鉴定 慢性胰腺炎(CP) 慢性胰腺炎(CP) Erbin TGF-β1 胰腺星状细胞(PSC) EMT Erbin TGF-β1 Smad 3 ERK
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R576
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 缩略词表10-11
• 前言11-13
• 第一部分 组织块法分离培养小鼠PSC13-31
• 一、实验材料13-16
• 二、实验方法16-23
• 三、实验结果23-28
• 四、讨论28-31
• 第二部分ERBIN及TGFΒ-1 在CP模型组和对照组PSC中的表达差异31-44
• 一、实验材料31-35
• 二、实验方法35-40
• 三、实验结果40-42
• 四、讨论42-44
• 第三部分ERBIN在TGF-Β1 诱导的EMT过程中的表达44-59
• 一、实验材料44-49
• 二、实验方法49-52
• 三、实验结果52-56
• 四、讨论56-59
• 全文总结59-60
• 参考文献60-66
• 综述66-71
• 参考文献69-71
• 硕士期间发表文章及科研工作71-72
• 致谢72-73

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本文编号：726232