反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒可视化分型检测

发布时间：2017-08-24 15:45

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【摘要】：目的应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)可视化检测丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型,为RTLAMP技术应用于现场或基层医院提供初步探索经验。方法首先,收集临床阳性样本并用荧光定量PCR分型检测,把样本基本分为1型和非1型。然后分别根据HCV 1b和2a基因型设计RT-LAMP引物并优化反应条件,通过互换模板实验验证这2套引物的特异性,并通过检测稀释的模板以验证引物的灵敏度。同时用钙黄绿素进行产物显色,使HCV分型检测可视化。最后用RT-LAMP方法检测临床样本,并计算阳性率,应用配对卡方检验比较RT-LAMP和荧光定量PCR的统计学差异。结果优化好的RT-LAMP体系的特异性好,对HCV 1b型的检测灵敏度为103 IU/mL,2a型的检测灵敏度为104 IU/mL。另外,利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相当。通过对临床样本分型检测,HCV 1b型样本的RTLAMP检测结果和荧光定量PCR差异无统计学意义(P0.05),HCV 2a型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异有统计学意义(P0.05),但是未检出的样本中有2例为HCV 2b型。结论 RT-LAMP对HCV的可视化分型检测具有较好的特异性和灵敏度,操作简便,具有在现场或基层医院的应用前景。
【作者单位】： 承德医学院病原生物学教研室;中国人民解放军白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心;
【关键词】： 丙型肝炎病毒(HCV) 反转录环介导等温扩增(RT-LAMP) 分型检测
【基金】：全军医药卫生科研基金项目(No.CBJ14C010)资助~~
【分类号】：R512.63;R440
【正文快照】： 丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是仅次于乙型肝炎病毒引起慢性肝炎的主要病原体,如果不进行正确治疗,将有相当比例的患者会发展为肝硬化甚至肝癌。根据HCV序列之间超过30%的差异,可将HCV主要分为6个基因型,每一型又可细分为不同的亚型。HCV基因分型检测具有重要的临床意

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本文编号：732168