糖皮质激素受体在肝衰竭患者中的表达及其机制的探讨

发布时间：2017-08-28 18:13

  本文关键词：糖皮质激素受体在肝衰竭患者中的表达及其机制的探讨

  更多相关文章： 慢加急性肝衰竭 GRα GRβ 模型 p38MAPK

【摘要】：目的:探讨慢加急性肝衰竭(ACLF)患者体内糖皮质激素受体(GR)亚型的表达情况及与ACLF患者预后的关系;并通过建立动物模型,研究GR在肝衰竭时发生变化的分子机制,为临床治疗提供思路。方法:1.收集2015年6月至2016年3月期间在苏州大学附属第一医院感染科住院的26例慢加急性肝衰竭病人及10例健康体检者(HCs)EDTA抗凝血,采用RT-PCR检测单个核细胞(PBMCs)内GRa及GRβ的表达,比较两组的GRa及GRβ表达差异,以及ACLF死亡者与存活者GRa及GRβ表达差异,分析GR与预后的关系。2.建立动物模型,将35只Balb/c小鼠随机分成正常对照组(第1组)、慢性肝损害组(第2组)、肝衰竭组(第3组)、1mg/Kg甲强龙治疗组(第4组)、2mg/Kg甲强龙治疗组(第5组)。除了正常组外,其余四组采用食用油稀释成20%的四氯化碳(CCl4)5ml/Kg腹腔注射,2次/周共8周,8周末第3、4、5组用D-氨基半乳糖(D-GalN)500mg/Kg及内毒素(LPS)100ug/Kg腹腔注射,建立慢加急性肝衰竭模型,同时第4、5组分别用1mg/Kg及2mg/Kg甲强龙治疗5天。3.HE后染色观察肝脏病理鉴定造模成功,并用免疫组化及Western blot检测GRa及GRβ的表达情况。同时用Western blot测定p38MAPK信号通路的活化情况,分析p38MAPK信号通路在肝衰竭时与GR亚型改变的关系及对GR的调控。结果:1.与健康人相比,ACLF患者外周血单个核细胞的GRαmRNA的表达水平降低(P0.05),而ACLF患者外周血单个核细胞的GRβmRNA的表达水平却高于健康人(P0.05)。2.ACLF好转组外周血单个核细胞的GRαmRNA的表达水平高于死亡组(P0.05),而GRβmRNA的表达水平无明显差异(P0.05)。3.HE染色:8周后,第1组7只老鼠无死亡,肝脏表面光滑,肝细胞完整,形态正常;第2组死亡2只,肝脏增大,表面粗糙,镜下出现脂肪变及纤维化;第3组死亡3只,肝组织充血肿胀,肝细胞在纤维化的基础上出现大块及亚大块坏死,中央静脉及胆管周围出现炎性细胞浸润;第4、5组经激素干预后均死亡1只,肝脏损伤的程度有所减轻。4.免疫组化:GRa在5组老鼠肝细胞均有表达,肝衰竭组GRa的阳性细胞数最少,正常组慢性肝损害组、激素治疗组肝衰竭组,而肝衰竭组GRβ阳性细胞数最多。5.Western blot:GRa及GRβ的表达情况与免疫组化检测的五组GRa及GRβ的表达的强弱趋势相同。肝衰竭组老鼠肝脏磷酸化的p38MAPK表达量增加,经激素干预后,磷酸化的p38MAPK表达量降低,且与GRa的改变相平行。结论:1.肝衰竭时GRa表达降低而GRβ的表达增高,可能与肝衰竭时的炎症细胞因子显著上调GRβ的表达,对GRa的作用较弱,而增高的GRβ可以与GRa结合成二聚体干扰其生物学活性。2.ACLF好转组GRαmRNA的表达水平高于死亡组(P0.05),而GRβmRNA的表达水平无明显差异(P0.05),说明可以用GRa来预测ACLF的预后。3.从HE染色的结果观察,CCl4能够诱导小鼠形成慢性肝损害,联合D-GalN及LPS可以诱导慢加急性肝衰竭,而激素干预可以改善肝脏损害程度。4.p38MAPK信号通路在肝衰竭时被激活,并参与了GR改变的调控,而激素干预通过抑制通路的激活发挥抗炎作用。
【关键词】：慢加急性肝衰竭 GRα GRβ 模型 p38MAPK
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 前言10-13
• 参考文献11-13
• 第一部分 糖皮质激素受体在慢加急性肝衰竭患者中的表达及与预后的关系13-20
• 材料13-14
• 实验方法14-16
• 结果16-17
• 讨论17-20
• 第二部分 慢加急性肝衰竭动物模型的建立及鉴定20-29
• 材料20-21
• 实验方法21-23
• 结果23-26
• 讨论26-29
• 第三部分 P38MAPK信号转导通路在肝衰竭时对糖皮质激素受体的调控29-36
• 材料29-31
• 实验方法31-33
• 结果33
• 讨论33-36
• 参考文献36-39
• 综述39-46
• 参考文献43-46
• 中英文缩率词表46-47
• 攻读学位期间发表论文47-48
• 致谢48-49

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本文编号：748808