不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞效率及毒性的比较

发布时间：2017-09-05 04:32

  本文关键词：不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞效率及毒性的比较

  更多相关文章： 肝脏库普弗细胞 转染效率 细胞毒性 RIP140-si RNA 免疫活性

【摘要】：目的:以三种转染试剂将RIP140-siRNA转染至肝脏库普弗细胞,通过不同的转染效率以及试剂的细胞毒性和RIP140-siRNA对库普弗细胞免疫活性之间的比较,探寻库普弗细胞si-RNA的最佳转染方式和条件。方法:本实验研究采用lipofectamine 2000,罗氏试剂(X-treme GENE siRNA Transfection Reagent)及嘌呤霉素筛选的慢病毒(1.0×108TU/ml)作为转染试剂,荧光倒置显微镜下观察细胞转染效果,ELISA检测不同试剂转染后库普弗细胞NF-κb,IL-2,IL-10,TNF-α的分泌情况,分析其免疫活性的变化,激光扫描共聚焦显微镜分析不同试剂转染后细胞RIP140的表达,通过流式细胞术(FCM)分析试剂转染后库普弗细胞的凋亡情况,以CCK-8试剂盒检测三种转染试剂对库普弗细胞增殖的抑制效应。对正常组库普弗细胞及三种试剂转染后细胞进行RT-RCR和Western blot检测,分析库普弗细胞的RIP1140基因和蛋白质表达情况。结果:以转染效率而言:慢病毒的转染效率最高,可达80%以上;罗氏试剂其次;lipofectamine 2000效果最差。在试剂的细胞毒性方面:流式细胞术分析罗氏试剂组细胞凋亡程度最低,以及CCK-8试剂盒结果显示罗氏试剂对库普弗细胞的毒性最小;慢病毒其次;lipofectamine 2000的细胞毒性最大。ELISA结果显示3种试剂转染库普弗细胞后,慢病毒细胞组(P0.05)免疫活性变化最大,NF-κb,IL-2,IL-10,TNF-α的分泌在转染高峰后出现不同程度的增多或减少,其他两组差异不明显(P0.05)。根据RT-RCR和Western blot结果得出慢病毒转染RIP140-siRNA效果最好,库普弗细胞RIP140呈现低表达状态,而lipofectamine 2000和罗氏试剂组明显高于慢病毒组(P0.05)。结论:在肝脏库普弗细胞的RIP140-siRNA转染层面,慢病毒转染法效果出色,能够满足实验研究的要求,达到较高的转染效率,并且通过实验条件的改进有着理想的细胞毒性。
【关键词】：肝脏库普弗细胞 转染效率 细胞毒性 RIP140-si RNA 免疫活性
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-12
• 1.材料和方法12-18
• 2.结果18-25
• 3.讨论25-28
• 全文小结28-29
• 参考文献29-32
• 文献综述32-50
• 参考文献42-50
• 致谢50-51
• 攻读硕士学位期间论文发表情况51

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本文编号：795829