天然产物EGCG对TP致免疫性肝损伤的保护作用及其机制研究

发布时间：2017-09-08 18:33

  本文关键词：天然产物EGCG对TP致免疫性肝损伤的保护作用及其机制研究

  更多相关文章： EGCG 雷公藤甲素 肝损伤 抗氧化作用 Th17/Treg失衡

【摘要】：目的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是一种从绿茶中分离得到的儿茶素类单体,具有抗炎和抗氧化等作用,可有效治疗或缓解肝损伤,本课题拟用雷公藤甲素(TP)建立小鼠免疫性肝损伤模型,并以此探讨EGCG对TP诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护性作用和机制。方法1.TP致小鼠免疫性肝损伤模型的构建及鉴定。将20只雌性C57BL/6小鼠(体重18-20g)随机分为两组,分别设为正常组和TP模型组。TP模型组的小鼠灌胃给予500μg/kg的TP,正常组同时给予等量的生理盐水,22h后分别取血,处死,取肝储存备用。两组小鼠分别采用赖氏法检测血清谷丙转氨酶(ALT)水平;并以HE染色法对各组小鼠肝脏组织形态学进行对比观测,再通过ELISA方法检测肝脏白细胞介素(IL)-17和IL-10的表达水平;RT-PCR方法检测肝脏中维甲酸孤儿核受体(ROR-γt)、叉头状转录因子(Foxp3)m RNA表达水平;以证实小鼠免疫性肝损伤模型构建成功。2.EGCG对TP诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护性作用和机制探讨。将40只雌性C57BL/6小鼠(体重18-20g)随机分为四组,即正常组、EGCG处理组、TP模型组、EGCG治疗模型组。EGCG处理组和EGCG治疗模型组每天经灌胃给予EGCG,剂量为5 mg/kg,每日两次,共计给药10天,正常组和TP模型组同时给予等量的生理盐水。给药10天后,TP模型组和EGCG治疗模型组的小鼠灌胃给予500μg/kg的TP,正常组和EGCG组同时给予等量的生理盐水,22h后取血,处死,取肝储存备用。采用赖氏法检测小鼠血清ALT水平;采用分光光度法检测肝匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)的变化水平;并以HE染色法对小鼠肝脏组织形态学进行对比观测,再通过ELISA方法检测肝脏IL-17和IL-10的表达水平;RT-PCR方法检测肝脏中ROR-γt、Foxp3、核转录因子-κB(NF-κB)和髓样分化因子88(My D88)m RNA表达水平;Western blotting方法检测肝脏中T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim3)和Toll样受体4(TLR4)的表达情况。结果1.与正常组比较,TP模型组中小鼠血清ALT水平明显升高(P0.005),肝脏病理切片显示具有较多肝细胞坏死和中性粒细胞浸润,提示TP造成了急性肝损伤;同时,肝脏中与Th17变化密切相关的IL-17及ROR-γt m RNA的水平也显著升高(P0.005);与Treg变化密切相关的IL-10及Foxp3 m RNA的水平明显下降(P0.005),表明TP诱导Th17/Treg失衡,成功构建了TP致免疫性肝损伤模型。2.EGCG治疗模型组小鼠ALT水平与TP模型组相比明显下降(P0.005);肝脏病理切片显示其肝细胞炎症坏死程度与TP模型组相比也明显减轻,提示了EGCG对TP诱导的急性肝损伤具有保护作用。TP模型组小鼠肝脏中MDA和IL-17的水平明显高于正常组(P0.005),SOD、GSH和IL-10的水平与正常组相比显著下降(SOD P0.05;GSH、IL-10 P0.005);而EGCG治疗模型组小鼠肝脏MDA、IL-17水平均明显下调(P0.005),SOD、GSH和IL-10表达水平增高,与TP模型组比较有显著性差异(SOD,P0.05;GSH、IL-10 P0.005)。TP模型组小鼠肝脏中ROR-γt、NF-κB及My D88 m RNA的水平明显高于正常组(P0.005),而Foxp3 m RNA的水平明显低于正常组(P0.005);EGCG治疗模型组小鼠肝脏ROR-γt、NF-κB及My D88 m RNA的水平均显著降低(P0.005),而Foxp3 m RNA水平表达上调,与TP模型组比较有显著性差异(P0.005)。TP模型组小鼠肝脏Tim3蛋白表达水平低于正常组(P0.005),而TLR4蛋白水平高于正常组(P0.005),EGCG治疗模型组小鼠Tim3蛋白表达水平显著升高(P0.05),而TLR4水平明显降低(P0.05)。其中,氧化指标MDA、SOD、GSH的改变表明EGCG具有抗氧化作用;IL-17、IL-10、ROR-γt、Foxp3的改变提示EGCG纠正了TP诱导的Th17/Treg失衡;Tim3、TLR4、NF-κB、My D88的变化显示EGCG纠正Th17/Treg失衡的机制。结论1.TP致小鼠免疫性肝损伤模型构建成功。2.EGCG通过其抗氧化作用及对Th17/Treg失衡的调节作用来保护TP所致的小鼠免疫性肝损伤。3.EGCG的免疫保护机制可能是通过促进Tim3表达上调、抑制TLR4-NF-k B-My D88信号通路而纠正Th17/Treg失衡。
【关键词】：EGCG 雷公藤甲素 肝损伤 抗氧化作用 Th17/Treg失衡
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-15
• 前言15-17
• 第一部分 TP致免疫性肝损伤模型的构建及鉴定17-26
• 1 材料与方法17-22
• 2 实验结果22-24
• 3 讨论24-26
• 第二部分 EGCG对免疫性肝损伤的保护作用及其机制研究26-39
• 1 材料与方法26-33
• 2 实验结果33-37
• 3 讨论37-39
• 参考文献39-43
• 全文总结43-44
• 文献综述 EGCG和TP在肝损伤中的研究进展44-50
• 参考文献47-50
• 致谢50-51
• 攻读硕士研究生期间发表的文章51

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本文编号：815641