iTRAQ定量蛋白质组学对乙肝肝硬化失代偿血清差异蛋白的鉴定及分析

发布时间：2017-09-09 10:44

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【摘要】：背景：乙肝相关性肝硬化失代偿(HBV-DLC)是一个全球性的卫生问题,现在预测HBV-DLC患者预后的主要方法是Child评分和MELD评分。然而,这两种评分标准都有明显的局限性。为了寻找更加准确、可靠的HBV-DLC预后标志物,我们开展了本研究。方法：采用基于同位素标记相对定量和绝对定量技术(iTRAQ)的蛋白质组学研究方法,分析正常、慢性乙型肝炎(CHB)、乙肝肝硬化代偿期(HBV-CLC)、乙肝肝硬化失代偿期(HBV-DLC)四组样本的血清蛋白表达谱,找出在HBV-DLC患者中异常表达的蛋白。采用ELISA、Western blot技术对质谱结果进行验证,并从中筛选更有价值的候选蛋白,对其进行后续的临床分析。结果：共有437个蛋白被鉴定出来。以Non-HBV-DLC组为对照,有21个蛋白在HBV-DLC患者中是异常表达的,其中包括18个下调蛋白,3个上调蛋白。通过生物信息学分析和文献检索,发现转铁蛋白和SERPINA1蛋白跟HBV-DLC患者预后的关系可能更密切。选取新的血清标本,用ELISA技术对这两个候选蛋白进行验证,发现转铁蛋白和SERPINA1蛋白在血清中的含量均是随着疾病的进展逐渐下降的,这和质谱检测的结果相一致。ROC分析发现转铁蛋白对HBV-DLC患者的诊断较能要高于SERPINA1 (AUC:0.86 vs 0.76, p0.01),提示转铁蛋白可能跟HBV-DLC患者预后的关系更大。因此,选择转铁蛋白用于后续的研究与验证。Western blot和免疫组化也发现了血清转铁蛋白的水平随着疾病的进展逐渐下降。对新的]HBV-DLC队列进行研究发现,血清转铁蛋白在HBV-DLC死亡组的水平要显著低于HBV-DLC存活组(p 0.01)。ROC分析提示转铁蛋白对HBV-DLC死亡患者的预测较能和MELD评分相似(AUC:0.80 vs 0.72, p=0.13)。结论：HBV-DLC患者的死亡或和血清转铁蛋白的下降有关。本研究提示基于iTRAQ标记的定量蛋白质组学技术在HBV-DLC预后标志物的研究中有较好的效果。
【关键词】：iTRAQ 定量蛋白质组学 乙肝肝硬化失代偿
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62;R575.2
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 1 材料与方法11-21
• 1.1 材料11-13
• 1.2 方法13-21
• 1.3 统计方法21
• 2 结果21-29
• 2.1 蛋白质鉴定及相对定量21-25
• 2.2 ELISA检测候选蛋白在血清中的表达水平25-27
• 2.3 Western Blot验证转铁蛋白在血清中的表达27
• 2.4 转铁蛋白在CHB、HBV-LC患者肝组织中的表达27-28
• 2.5 ELISA检测转铁蛋白在HBV-DLC亚群中的表达水平28-29
• 3 讨论29-32
• 参考文献32-35
• 文献综述35-41
• 参考文献39-41
• 致谢41-42
• 硕士期间发表的学术论文及参加学术活动42

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本文编号：819987