急性胰腺炎肠道菌群的变化以及其与炎症的关系

发布时间：2017-09-09 19:08

  本文关键词：急性胰腺炎肠道菌群的变化以及其与炎症的关系

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【摘要】：背景:急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是消化系统的常见疾病,临床上,轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)患者不伴有器官衰竭和并发症,病情程度轻,病死率极低,而重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)患者病程早期易出现器官功能障碍,病死率可达36-50%,若后期出现继发感染,则病死率更高。近年来,越来越多的证据表明,肠道菌群在AP病情进展中发挥着重要的作用,肠道微生态的平衡可以通过调节免疫系统和代谢途径,并形成肠粘膜生物屏障,从而减少细菌过度增殖及肠源性感染的发生。目的:通过收集AP患者血清、粪便,测定血液中炎症因子、肠粘膜屏障功能相关指标,并对肠道菌群进行16S rDNA测序分析,明确AP患者肠道菌群的变化,评价肠道菌群的变化在AP患者病情进展中的作用。研究方法:自2015年7月至2015年12月纳入符合入组标准的AP患者,收集所有患者入院后的血液,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immuno sorbent assay,ELISA)测定血液中的炎症相关指标:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleuki n-18,IL-18),以及肠粘膜屏障功能相关指标:二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)。收集患者粪便,提取DNA,选定16S rDNA V4区段进行聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增,结合Illumina Miseq高通量测序平台测序鉴定肠道菌群组成,表达峰度,最后收集患者临床资料,进行统计学分析:1、将AP分为MAP,中度重症AP(moderately severe acute pancreatitis,MSAP),SAP三组,比较三组之间基本情况、相关指标、肠道菌群的差异;2、根据是否出现感染性并发症将MSAP、SAP患者分为感染与非感染组,比较两组之间基本情况、相关指标、肠道菌群的差异;3、将肠道菌群与相关指标进行斯皮尔曼(spearman)相关因素分析,了解肠道菌群与病情、炎症反应、肠粘膜屏障功能的关系。结果:1.共纳入ap患者116例,其中男性、女性各58例,map41例,msap52例,sap23例,年龄51.6±14.6岁,平均起病天数2.8±1.7天,血液及粪便收集时间为起病4.6±2天。2.map、msap、sap三组间炎症相关指标比较:c-反应蛋白(c-reactiveprotein,crp)水平:msap、sap组高于map组(p0.05);il-1β、tnf-α水平:sap组高于msap、map组(p0.05),msap组高于map组(p0.05);降钙素原(procalcitonin,pct)、dao水平:sap组高于msap、map组(p0.05);il-18水平:sap组高于map组(p0.05)。3.map、msap、sap三组间肠道菌群主要结果差异:(1)116个样品共产生847个操作分类单元(operationaltaxonomicunit,otu),三组之间肠道菌群物种多样性无明显差异(p0.05)。(2)门水平:放线菌门数量,sap组较map组减少(p0.05)。(3)纲水平:β-变形菌纲数量,msap组较map组增加(p0.05)。(4)目水平:伯克氏菌目数量,msap组较map组增加(p0.05);双歧杆菌目数量,sap组较map组减少(p0.05)。(5)科水平:双歧杆菌科、乳杆菌科数量,sap组较map组减少(p0.05)。(6)属水平:有益菌双歧杆菌数量,sap组较map、msap组减少(p0.05);乳酸杆菌数量,sap组较map组减少(p0.05);faecalibacterium、butyricicoccus属数量,msap组较map、sap组增多(p0.05)。(7)种水平:有益菌普拉梭菌、butyricicoccuspullicaecorum菌数量,msap组较map、sap组增多(p0.05);罗伊氏乳酸杆菌,sap、msap组较map组减少(p0.05)。4.感染组与非感染组比较:(1)感染组入院24h急性生理与慢性健康(acutephysiologyandchronichealthevaluation-ii,apache-ii)评分、48hapache-ii评分、住院天数、icu住院天数、dao水平均高于非感染组(p0.05)。(2)感染组有益菌丁酸梭菌、butyricicoccuspullicaecorum菌数量较非感染组明显减少(p0.001)。5.肠道菌群与相关指标的相关分析:条件致病菌粪球菌属(r=0.351)与il-1β水平呈正相关;肠球菌属(r=0.208)、变形杆菌属(r=0.300)、假单胞菌属(r=0.307)与TNF-a水平呈正相关;葡萄球菌属(r=0.236)与IL-18水平呈正相关。结论:1、病程早期,MAP、MSAP、SAP三组之间肠道菌群的物种多样性虽无明显差异,但SAP组、MSAP组与MAP组相比,条件致病菌增多,有益菌数量减少,提示早期肠道菌群失调可能在AP的病情进展中起了一定的作用;2、条件致病菌的增多和有益菌的减少可能参与了AP的炎症反应,促使MAP、MSAP向SAP转化,并使其易于发生感染性并发症。
【关键词】：急性胰腺炎 肠道菌群 16S rDNA 炎症因子
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R576
【目录】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 中英文缩略词对照表11-12
• 第1章 引言12-13
• 第2章 对象和方法13-18
• 2.1 研究对象13-14
• 2.1.1 入选标准13
• 2.1.2 排除标准13-14
• 2.1.3 样本量计算14
• 2.2 实验方法14-17
• 2.2.1 主要试剂盒14
• 2.2.2 血液标本的处理及保存14-15
• 2.2.3 粪便标本的处理及保存15-16
• 2.2.4 16SrDNA测序16-17
• 2.3 统计学分析17-18
• 第3章 结果18-38
• 3.1 一般资料18-19
• 3.2 炎症及肠粘膜功能相关指标19
• 3.3 16SrDNA测序结果19-33
• 3.3.1 OTU聚类及丰度分析19-24
• 3.3.2 多样性分析24-25
• 3.3.3 物种注释分析25-33
• 3.4 感染组与非感染组的比较33-36
• 3.4.1 患者一般情况33-34
• 3.4.2 感染组与非感染组组间菌群差异分析34-36
• 3.5 肠道菌群与相关指标的相关分析36-38
• 第4章 讨论38-41
• 第5章 结论41-42
• 致谢42-43
• 参考文献43-45
• 攻读学位期间的研究成果45-46
• 综述46-51
• 参考文献50-51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：822233