相关miRNA的表达及其甲基化与异烟肼致大鼠肝损伤的关系

发布时间：2017-09-10 15:30

  本文关键词：相关miRNA的表达及其甲基化与异烟肼致大鼠肝损伤的关系

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【摘要】：目的探讨miRNA-122、-192、-193、-125b、-106b表达及miRNA-122、-125b、-106b甲基化与异烟肼(isoniazid,INH)致大鼠肝损伤的关系;阐明miRNA-122、-125b、-106b参与INH致肝损伤的发生机制。方法将104只SD大鼠随机分为空白组(8只)、实验组(48只)和平行对照组(48只)。实验组与平行对照组各设3d、7d、10d、14d、21d、28d时间组,每组8只。实验组给予异烟肼55 mg·kg-1·d-1连续灌胃,平行对照组给予等容积蒸馏水,各时间点处死各组所有大鼠,保存血浆和肝组织。肝组织经HE染色观察病理改变;测定血浆ALT、AST活性;RT-PCR检测miRNA、mRNA表达;qMSP检测miRNA甲基化水平;ELISA分析相关蛋白含量。结果1肝组织病理和血浆ALT、AST水平分别在给药7d、10d发生明显改变,提示肝损伤造模成功。2与空白组及平行对照组比较,随着给药时间延长,大鼠肝组织中miRNA-122、-192、-125b、-106b表达水平逐渐下降,分别在第14d、14d、21d、21d达到低谷,而miRNA-193表达则呈上升趋势,第21d达峰值,析因分析显示,给药与否和不同给药时间组的差异均有统计学意义,且两因素间存在交互效应(均P0.05)。3与空白组及平行对照组比较,随着给药时间延长,大鼠肝组织中miRNA-122、-125b、-106b甲基化水平呈上升趋势,给药与否和不同给药时间组的差异也均有统计学意义,且两因素间也存在交互效应(均P0.05)。4miRNA-122的上游pri-miR-122及HNF-4α、C/EBPα基因mRNA于给药第3d呈现低表达,并随着给药时间而降低,而其下游的Cycling G1、CAT-1基因mRNA及蛋白表达则随着给药时间延长而上升(均P0.05),且给药与否和不同给药时间组间存在交互效应(均P0.05)。5 miRNA-106b、-125b共同作用的下游MAPK14、STAT3基因mRNA表达随着给药时间延长呈高表达,分别在第21d和14d达峰值。STAT3蛋白与其mRNA、STAT3的磷酸化蛋白p-STAT3以及pSTAT3调控的下游RORγt mRNA等4个指标的表达同步上升,但MAPK14表达却呈下降趋势。同时,RORγt调控的下游炎症因子IL-17、IL-6、TNF-α的mRNA和蛋白以及IL-17调控的CXCL1、MIP-2因子mRNA和蛋白均随着给药时间的延长而呈高表达。上述因子在给药与否和不同给药时间组间均存在交互效应(均P0.05)。6在给药的第3天,大鼠肝组织中检出miRNA-122、-192、-125b、-106b表达水平的显著改变,明显早于血浆ALT、AST变化(第10d),且两类指标间存在负相关(均P0.05)。7在给药的第7天,大鼠肝组织中检出miRNA-122、-125b、-106b甲基化水平的显著改变,早于血浆ALT、AST变化(第10d),且两类指标间存在正相关(均P0.05)。结论1肝组织中miRNA-122、-192、-125b、-106b的低表达与INH致大鼠肝损伤有关系。2肝组织中miRNA-122、-125b、-106b启动子区CpG岛的高甲基化与INH致大鼠肝损伤有关系。3转录因子HNF-4α、C/EBPα调控miRNA-122低表达并进一步调控靶基因Cycling G1、CAT-1参与肝损伤的发生过程,而低表达miRNA-125b、-106b则通过靶向STAT3调控炎症因子IL-17、IL-6、TNFα分泌参与肝损伤的发生。
【关键词】：异烟肼 肝损伤 miRNA 甲基化
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R52;R575
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 实验研究13-49
• 1.1 材料与方法13-22
• 1.1.1 主要材料13-14
• 1.1.2 动物的选择及分组处理14
• 1.1.3 大鼠标本的采集14-15
• 1.1.4 大鼠肝组织病理学观察15
• 1.1.5 大鼠肝功能指标的检测15
• 1.1.6 肝组织miRNA-122、-192、-193、-125b、-106b表达水平检测15-17
• 1.1.7 肝组织miRNA-122、-125b、-106b启动子区CpG岛甲基化检测..71.1.8 肝组织相关基因mRNA表达水平的检测17-19
• 1.1.8 肝组织相关基因mRNA表达水平的检测19-21
• 1.1.9 大鼠肝组织相关基因的蛋白含量检测21
• 1.1.10 统计学分析21-22
• 1.2 结果22-34
• 1.2.1 大鼠肝损伤模型的鉴定22-23
• 1.2.2 肝组织中5种miRNAs表达与INH致大鼠肝损伤的关系23-25
• 1.2.3 肝组织中3种miRNAs甲基化与INH致大鼠肝损伤的关系25-26
• 1.2.4 肝组织中3种miRNAs甲基化水平与其表达水平的关系26
• 1.2.5 miRNA-122在异烟肼致大鼠肝损伤中的调控作用26-29
• 1.2.6 miRNA-125b、-106b在INH致肝损伤大鼠中的调控作用29-34
• 1.3 讨论34-42
• 1.3.1 INH诱导大鼠肝损伤模型35
• 1.3.2 肝组织中5种miRNAs表达水平与INH致肝损伤有关系35-36
• 1.3.3 miRNA-122、-125b、-106b甲基化水平与INH致肝损伤有关系36-37
• 1.3.4 miRNA-122、-125b、-106b甲基化与其表达存在相关性37-38
• 1.3.5 miRNA-122参与INH致肝损伤发生机制38-39
• 1.3.6 miRNA-125b、106b参与INH致肝损伤发生机制39-42
• 1.3.7 不足与展望42
• 参考文献42-49
• 第2章 综述 miRNA及DNA甲基化与肝脏疾病的研究进展49-59
• 2.1 miRNA的发现、生物合成及功能49-50
• 2.1.1 miRNA发现49
• 2.1.2 miRNA生物合成49
• 2.1.3 miRNA功能49-50
• 2.2 miRNA与肝脏疾病的研究50-52
• 2.2.1 miRNA与病毒性肝炎50
• 2.2.2 miRNA与酒精性、非酒精性脂肪性肝病50-51
• 2.2.3 miRNA与肝纤维化51
• 2.2.4 miRNA与急性肝功能衰竭51
• 2.2.5 miRNA在药物性肝损伤中的表达差异51-52
• 2.3 DNA甲基化、调控基因表达机制52-53
• 2.3.1 DNA甲基化52-53
• 2.3.2 DNA甲基化调控基因表达机制53
• 2.4 DNA甲基化与肝脏疾病的研究53-54
• 2.4.1 DNA甲基化与病毒性肝炎53
• 2.4.2 DNA甲基化与酒精性及非酒精性肝病53-54
• 2.4.3 DNA甲基化与药物性肝损伤54
• 参考文献54-59
• 结论59-60
• 致谢60-61
• 导师简介61-62
• 作者简介62-63
• 学位论文数据集63

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本文编号：825086