SIRT6在溃疡性结肠炎发病机制中的作用研究

发布时间：2017-09-12 03:26

  本文关键词：SIRT6在溃疡性结肠炎发病机制中的作用研究

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【摘要】：背景与目的 溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis, UC)是炎症性肠病(Inflammatory bowel disease, IBD)的一种,以易感人群反复发作性肠道炎症造成慢性肠黏膜损伤为主要特征。UC的发病原因和发病机理还不甚清楚。目前被广泛接受的观点认为UC的发生发展伴随了肠上皮内免疫应答、黏膜屏障、代谢平衡等功能的改变或紊乱。SIRT6是NAD+依赖性第1II类组蛋白去乙酰化酶家族中的一个成员,可以通过对组蛋白及非组蛋白的去乙酰化作用,调控基因转录和蛋白功能,参与调节体内多种重要病理生理学过程,如糖代谢平衡、衰老、肿瘤和炎症等。本研究的目的是(1)探究SIRT6在肠道内的表达丰度及表达定位；(2)探究UC患者肠黏膜活检组织及实验性结肠炎模型小鼠结肠内SIRT6表达是否发生改变；如果是,(3)探究SIRT6的表达改变是否在肠道炎症及黏膜损伤中发挥了重要作用；(4)探究SIRT6在肠道炎症及黏膜损伤中的作用机制。材料与方法 以DSS诱导实验性结肠炎小鼠作为体内实验模型,正常成年小鼠结肠上皮(Young adult mouse colon, YAMC)细胞系作为体外实验模型。运用Cre-loxP系统通过小鼠杂交方法构建肠上皮内特异性SIRT6敲除动物模型。17例正常人肠道黏膜和15例UC患者肠道黏膜活检标本收集于北京协和医院内镜中心。利用分子克隆技术构建SIRT6过表达载体,建立YAMC细胞的SIRT6过表达模型。利用小干扰RNA技术实现YAMC细胞内SIRT6敲低模型的建立。此外,免疫荧光染色被用以确定SIRT6的表达定位,qRT-PCR、Western blot、RNA-seq和MSD ELISA等方法被用以检测人结肠黏膜活检标本、小鼠结肠组织、YAMC细胞或小鼠血浆内目的基因的表达水平。结果SIRT6在小鼠结肠中有较高水平的表达,且通过免疫荧光染色发现SIRT6主要定位于近隐窝基底侧的肠道上皮细胞胞核内。连续7日DSS诱导实验性结肠炎的发生发展过程伴随着结肠内SIRT6蛋白表达的显著下调。SIRT6 mRNA含量在UC患者肠黏膜活检组织中显著减少。肠上皮细胞特异性SIRT6的敲除不影响小鼠的生存生长和肠道发育,但是显著增加了小鼠对DSS诱导实验性结肠炎的易感性。体外实验中,我们发现IFN-y和H202刺激能直接抑制YAMC细胞内SIRT6蛋白的表达,且这种抑制能力是剂量及时间依赖性的。SIRT6的敲低能够明显降低YAMC对多种损伤及致死性刺激的抵抗能力,而SIRT6的过表达能够显著扭转这种现象。通过RNA-seq我们发现R-spondin-1 (Rspo1)基因在TNFa的刺激下会因SIRT6的敲低而出现更加明显的下调。Rspol是肠道上皮细胞内重要的生长因子之一,因此Rspol的下调可能是SIRT6敲低细胞对损伤刺激易感性增加的原因之一。结论SIRT6在肠道上皮细胞抵抗炎症反应多种损伤刺激中起到重要的保护作用,是溃疡性结肠炎治疗研究的潜在靶点之一。
【关键词】：SIRT6 溃疡性结肠炎 肠上皮 Rspol DSS诱导实验性结肠炎 肠上皮特异性敲除小鼠模型 过表达 小干扰RNA RNA深度测序
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574.62
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词表9-10
• 前言10-16
• 第一部分 SIRT6在肠道炎症中的变化与作用研究16-64
• 第一节 SIRT6在小鼠肠道内表达定位及在DSS诱导结肠炎小鼠模型和溃疡性结肠炎患者肠道组织中表达变化的研究16-40
• 引言16-17
• 实验材料17-20
• 实验方法20-27
• 实验结果27-34
• 讨论34-38
• 结论38-40
• 第二节 小鼠肠道上皮细胞内SIRT6在DSS诱导结肠炎中作用的研究40-64
• 引言40-41
• 实验材料41-42
• 实验方法42-50
• 实验结果50-61
• 讨论61-63
• 结论63-64
• 第二部分 结肠上皮细胞内SIRT6作用及机制的研究64-128
• 第一节 SIRT6在结肠上皮细胞内功能的研究64-102
• 引言64-65
• 实验材料65-70
• 实验方法70-85
• 实验结果85-95
• 讨论95-100
• 结论100-102
• 第二节 SIRT6对肠道上皮细胞保护作用的机制初探102-128
• 引言102-103
• 实验材料103-104
• 实验方法104-106
• 实验结果106-111
• 讨论111-114
• 结论114-128
• 全文总结128-130
• 缺陷与不足130-132
• 参考文献132-142
• 综述142-152
• 参考文献147-152
• 致谢152-15

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Ping Li;Mei-Lan Liang;Ying Zhu;Yao-Yao Gong;Yun Wang;Ding Heng;Lin Lin;;Resveratrol inhibits collagen Ⅰ synthesis by suppressing IGF-1R activation in intestinal fibroblasts[J];World Journal of Gastroenterology;2014年16期

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本文编号：834815