多不饱和脂肪酸调节lox-1表达通路缓解脂肪肝炎性损伤的作用

发布时间：2017-09-26 08:18

  本文关键词：多不饱和脂肪酸调节lox-1表达通路缓解脂肪肝炎性损伤的作用

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【摘要】：近年来,随着非酒精性脂肪肝(NAFLD)患病率的逐年攀升,且低龄化趋势愈加明显,受到国内外广泛关注。流行病学研究显示,鱼油和紫苏油因富含ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)而具有调节脂代谢的作用,对NAFLD也有较为明显的保护作用。NAFLD作为代谢综合征在肝脏的表征,与糖尿病及心脑血管疾病的发生关系密切。已有大量研究表明,糖尿病、肾脏炎症和纤维化等病理过程受到了氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的影响。LOX-1的表达受控于转录因子激活蛋白1(AP-1)、c-jun氨基末端激酶(JNK)等,与内质网应激(ERS)系统密切相关,这些因素均与NAFLD的病理过程相关联。研究显示,PUFAs的干预能影响巨噬细胞、内皮细胞等多种细胞内LOX-1的表达,对NAFLD有保护作用。因此,本文将针对NAFLD的发生发展与LOX-1的相互关系及PUFAs调节LOX-1表达通路缓解NAFLD的作用进行研究。目的:研究ω-3 PUFA缓解NAFLD发生发展过程中LOX-1表达通路的调控作用。方法:通过高脂高胆固醇自由饮食建立NAFLD模型,选用SD雄性大鼠192只,每组48只,随机分成4组:正常对照组(CON),高脂组(HFD),鱼油组(F),紫苏油组(P)。于饲喂的4w、8w、12w、16w时,每组分别处死12只,收集血清,快速摘取肝脏并称重。试剂盒检测大鼠血清中总胆固醇(TCH)和总甘油三酯(TG)低密度脂蛋白(LDL-C)的含量,谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活力等生化指标;苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色;采用荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)方法检测各组LOX-1、内质网压力(ERS)相关蛋白(BIP、IRE1、ATF6、ATF4)、炎性分子(IL-1β、TNFα)及炎性通路信号分子(p-JNK、c-Jun、c-Fos等)的m RNA和蛋白质的表达情况。体外实验选用L02细胞,实验分为CON组、PA组和PA+DHA组。油红O染色确定PA孵育L02细胞的负荷浓度。RT-PCR和WB检测各组LOX-1、内质网压力(ERS)相关蛋白(BIP、IRE1、ATF6、ATF4)、炎性分子(IL-1β、TNFα)及炎性通路信号分子(p-JNK、c-Jun、c-Fos)的m RNA和蛋白质的表达情况。结果:动物实验中,HFD组与CON组相比,肝指数明显升高,血清中TCH、LDL-C、ALT、AST、FFA、SOD、GST含量均显著升高(P0.01),肝细胞出现气球样变,观察到大小泡混合型肝细胞脂肪变性;小叶内和汇管区周围观察到明显炎性浸润和纤维化,呈现典型的炎性病变;随饲喂时间的延长,HFD组较CON组LOX-1的表达显著增加;HFD组较CON组ERS相关蛋白BIP、IRE1、ATF6、ATF4表达显著升高(P0.01);HFD组较CON组炎性指标IL-1β、TNFα表达显著升高(P0.01);HFD组较CON组p-JNK、c-Jun、c-Fos表达显著升高(P0.01);而鱼油及紫苏油干预组在所检测的指标上均表现为效果明显改善。细胞实验中,浓度为0.2mmol/L的PA孵育24h相较于正常组LOX-1、BIP、IRE1、ATF6、ATF4、IL-1β、TNFα的基因和蛋白均表达上调,出现ERS和炎性因子表达上调;而0.2mmol/L的PA和0.01mmol/L的DHA同时孵育24h,LOX-1的表达显著下调,相应的ERS(BIP、IRE1、ATF6、ATF4)和炎性反应(IL-1β、TNFα)显著降低。结论:ω-3 PUFA能明显降低血脂、改善肝功能外,能缓解ERS,并可能通过调节IRE1-JNK-AP-1-LOX-1信号通路,抑制LOX-1及其他炎性因子的表达,从而抑制炎性反应和纤维化进程,干预NAFLD的发展。
【关键词】：多不饱和脂肪酸 非酒精性脂肪肝 氧化低密度脂蛋白受体1 内质网应激
【学位授予单位】：武汉轻工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.5
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 主要缩写词10-12
• 1 绪论12-17
• 1.1 非酒精性脂肪肝病简介12-13
• 1.1.1 NAFLD的发病机制12
• 1.1.2 NAFLD与内质网应激12-13
• 1.1.3 肝纤维化13
• 1.2 凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1简介13-15
• 1.2.1 LOX-1与内质网应激14
• 1.2.2 LOX-1与炎症14-15
• 1.3 炎症小体15
• 1.4 Ω-3多不饱和脂肪酸简介15-16
• 1.4.1 ω-3 PUFA与炎症15-16
• 1.4.2 ω-3 PUFA与NAFLD16
• 1.5 立题依据与研究内容16-17
• 2 动物实验观察Ω-3 PUFA对LOX-1炎性途径的调节作用17-43
• 2.1 前言17
• 2.2 实验材料和实验方法17-31
• 2.2.1 实验材料17-24
• 2.2.2 实验方法24-31
• 2.3 实验结果31-42
• 2.3.1 大鼠肝指数结果31
• 2.3.2 血脂指标结果31-32
• 2.3.3 肝功能指标结果32-33
• 2.3.4 血清FFA、SOD、GST变化结果33-34
• 2.3.5 形态学分析34-36
• 2.3.6 大鼠肝组织Olr-1基因表达变化和LOX-1蛋白表达变化36-37
• 2.3.7 大鼠肝组织ERS标志分子表达变化37-39
• 2.3.8 肝组织纤维化相关基因表达变化39-40
• 2.3.9 肝组织炎症因子表达变化40-41
• 2.3.10 大鼠肝组织p-JNK、AP-1蛋白表达变化41-42
• 2.4 结论42-43
• 3 离体细胞实验43-56
• 3.1 前言43
• 3.2 实验材料与方法43-48
• 3.2.1 实验材料43-45
• 3.2.2 实验方法45-48
• 3.3 实验结果48-55
• 3.3.1 PA体外诱导L02肝细胞脂肪变性模型的建立48-50
• 3.3.2 L02细胞LOX-1 蛋白表达变化50
• 3.3.3 内质网应激标志分子的表达变化50-52
• 3.3.4 炎症发应52-53
• 3.3.5 炎性小体在mRNA水平表达情况53-54
• 3.3.6 L02细胞p-JNK、c-Fos、c-Jun蛋白表达变化54-55
• 3.4 小结55-56
• 4 讨论56-59
• 4.1 全文总结58
• 4.2 展望58-59
• 参考文献59-65
• 致谢65-66
• 攻读学位期间的研究成果66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：922458