化合物抑制体内外巨噬细胞活化释放HMGB1及其机制研究

发布时间：2017-09-26 23:36

  本文关键词：化合物抑制体内外巨噬细胞活化释放HMGB1及其机制研究

  更多相关文章： 巨噬细胞 RAW264.7 LPS 肝衰竭 高迁移率族蛋白1 白藜芦醇 紫草素

【摘要】：乙型肝炎病毒能引起人类乙型病毒性肝炎,采取早期干预措施减轻肝炎,对于降低“病死率”具有重要意义。巨噬细胞通过释放促炎细胞因子在炎症中起着重要作用。高迁移率族蛋白1(HMGB1)以主动方式从活化巨噬细胞释放出去,是一个重要晚期致炎因子。 本课题旨在用LPS活化巨噬细胞体外模型筛选较优抗炎化合物,进一步研究其抗炎作用是否与HMGB1有关并对其机制进行探析。本论文分为以下四个部分： 第一部分较优抗炎化合物的筛选 目的从40种化合物中体外筛选较优抗炎化合物。 方法RAW264.7细胞经不同浓度的LPS和/或化合物处理24小时后,用ELISA或Griess法检测上清液中NO、TNF-α和/或IL-6等指标水平,确定LPS剂量并筛选较优抗炎化合物。 结果1、在合适LPS剂量范围内,暴露于LPS的RAW264.7细胞中NO、TNF-α和IL-6显著升高,且呈剂量依赖性。2、筛选出白藜芦醇(Res)和紫草素(Shik)等7种较优抗炎化合物,均能显著下调NO和TNF-α表达。3、Res和Shik剂量依赖地下调NO和TNF-α表达。 结论1、筛选出7种较优抗炎化合物；2、Res和Shik具有较好剂量依赖抗炎效果。 第二部分白藜芦醇(Res)减轻炎症作用并减少RAW264.7细胞中LPS诱导的HMGB1和TLR4的表达。 目的研究Res抗炎作用及机制。 方法暴露于不同剂量LPS24小时的RAW264.7细胞,同时经Res或不经Res处理后用ELASA或Griess法测定上清液中TNF-α、IL-6、NO水平,并用qRT-PCR及Western Blot试验检测3MGB1和TLR4表达。 结果1、Res显著减少IL-6, NO和TNF-α表达。2、Res显著减少HMGB1和TLR4表达。 结论1、Res能阻断LPS诱导RAW264.7细胞的炎症效应。2、HMGB1表达下调是Res的作用机制之一。3、Res也可影响HMGB1-TLR4信号通路。第三部分紫草素(Shik)通过IFN-β和NF-κB信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞H[MGB1的释放。目的研究Shik的抗炎作用及机制。 方法暴露于不同剂量LPS24小时的RAW264.7细胞,同时经Shik或不经Shik处理后用ELISA或Griess法测定上清液中NF-α、IL-6、NO水平,并用qRT-PCR、 ELISA或Western Blot试验检测HMGB1、IFN-0和细胞核对细胞质NF-K B比率表达。 结果1、Shik能显著减少IL-6, NO和TNF-α表达。2、Shik显著减少LPS组HMGB1、IFN-β表达和细胞核对细胞质NF-κB蛋白表达比率。3、IFN-β信号分子JAK和NF-κB抑制剂显著减少HMGB1表达。 结论1、Shik拮抗LPS引起RAW264.7细胞炎症应答；2、下调HMGB1表达是Shik抗炎机制之一,这与IFN-β和NF-κB信号通路有关。 第四部分白藜芦醇(Res)和紫草素(Shik)通过调节HMGB1发挥抗炎作用的体内研究 目的研究Res和Shik在肝衰竭小鼠抗炎作用。 方法用HE染色观察半乳糖胺(GalN)/LPS急性肝衰竭小鼠肝损伤情况,检测血清ALT/AST,和用ELISA检测IMGB1水平。 结果1、GalN/LPS组ALT/AST显著升高,且肝损伤明显。2、与模型组相比,Res治疗组ALT/AST未显著降低,且肝损伤明显。3、Shik治疗组ALT/AST显著降低,且肝损伤减轻,但小鼠血清HMGB1水平无显著变化。 结论1、成功建立肝衰竭小鼠模型。2、Res无显著体内抗炎作用。3、Sh ik具有一定体内抗炎作用,但未显著下调血清HMGB1水平。
【关键词】：巨噬细胞 RAW264.7 LPS 肝衰竭 高迁移率族蛋白1 白藜芦醇 紫草素
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 致谢5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 插图和附表清单12-14
• 英文缩写注释表14-18
• 1 研究背景18-21
• 2 较优抗炎化合物的筛选21-38
• 2.1 前言21-22
• 2.2 材料与试剂22-23
• 2.3 实验仪器23
• 2.4 实验方法23-27
• 2.5 统计方法27
• 2.6 结果27-34
• 2.7 讨论34-37
• 2.8 结论37-38
• 3 白藜芦醇减轻炎症作用并减少RAW264.7细胞中LPS诱导的HMGB1和TLR4的表达38-62
• 3.1 前言38-39
• 3.2 材料与试剂39-41
• 3.3 实验仪器41-42
• 3.4 实验方法42-51
• 3.5 统计方法51
• 3.6 结果51-59
• 3.7 讨论59-60
• 3.8 结论60-62
• 4 紫草素通过IFN-B和NF-KB信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞HMGB1的释放62-82
• 4.1 前言62
• 4.2 材料与试剂62-65
• 4.3 实验仪器65-66
• 4.4 实验方法66-69
• 4.5 统计方法69
• 4.6 结果69-79
• 4.7 讨论79-81
• 4.8 结论81-82
• 5 白藜芦醇和紫草素通过调节HMGB1发挥抗炎作用的体内研究82-93
• 5.1 前言82-83
• 5.2 材料与试剂83-84
• 5.3 实验仪器84-85
• 5.4 实验方法85-86
• 5.5 统计方法86
• 5.6 结果86-91
• 5.7 讨论91-92
• 5.8 结论92-93
• 6 全文结论93-94
• 参考文献94-105
• 综述105-141
• 参考文献131-141
• 作者简历及在读期间所取得的科研成果141-144

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：926422