白介素-37对转化生长因子-β1活化的人肝星状细胞的影响

发布时间：2017-09-28 18:03

  本文关键词：白介素-37对转化生长因子-β1活化的人肝星状细胞的影响

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【摘要】：目的:1.利用重组人白细胞介素-37(interleukin-37,IL-37)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)同时干预人LX2-肝星状细胞(LX2-hepatic stellate cell,LX2-HSC),观察重组人IL-37对TGF-β1诱导活化的人LX2-HSC的增殖及凋亡的影响,并观察其对人LX2-HSC表达的I型胶原蛋白(collagen I,Col-I)、III型胶原蛋白(collagen III,Col-III)的影响。2.初步探讨重组人IL-37抗肝纤维化的作用及机制。方法:1.细胞培养:以RPMI-1640培养基培养人LX2-HSC。2.实验分组:(1)空白对照组(A组):只含有RPMI-1640培养基;(2)实验对照组(B组):含TGF-β1 5ng/ml,不含重组人IL-37;(3)实验组(C组):含TGF-β1 5ng/ml、重组人IL-37 100ng/ml;(4)实验组(D组):含TGF-β1 5ng/ml、重组人IL-37 200ng/ml;(5)实验组(E组):含TGF-β1 5ng/ml、重组人IL-37 400ng/ml。3.检测人LX2-HSC的细胞吸光度并计算细胞增殖抑制率,检测细胞凋亡率及Col-I、Col-III的表达:在各组不同浓度重组人IL-37作用下的人LX2-HSC分别培养12h、24h、48h后,用MTT法检测人LX2-HSC的增殖情况,测量各组细胞吸光度,并通过细胞吸光度计算各组细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI双染细胞后用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;相同方法培养人LX2-HSC,收集药物处理后的细胞上清液,用酶联免疫吸附实验(elisa法)检测培养细胞上清液中col-i及col-iii的浓度。4.统计学处理:两个随机独立样本均数比较用t检验;多个样本均数比较用单因素方差分析;多个样本均数之间的两两比较用lsd法;结果均以p0.05为有统计学差异。采用spss17.0的统计软件分析所有数据。结果:1.对人lx2-hsc的增殖抑制作用:在重组人il-37与tgf-β1共培养12h、24h、48h后,各时间点a组与b组细胞吸光度比较,有统计学差异(p0.05),且b组细胞吸光度高于a组;b组、c组、d组、e组细胞吸光度及增殖抑制率比较,有统计学差异(p0.05),且随着重组人il-37浓度增加,各组细胞吸光度降低,细胞增殖抑制率增加;12h和24h时c组与d组、e组的细胞吸光度及细胞增殖抑制率比较均有统计学差异(p0.05),d组与e组的细胞吸光度及细胞增殖抑制率比较均无统计学差异(p0.05);而48h时c组、d组、e组的细胞吸光度及细胞增殖抑制率比较均无统计学差异(p0.05)。相同药物浓度组各时间点的比较,结果显示各药物浓度组在各时间点的细胞吸光度及细胞增殖抑制率比较均有统计学差异(p0.05),且随着培养时间延长,各组细胞吸光度降低、细胞增殖抑制率增加。2.对人lx2-hsc凋亡率的影响:各时间点a组与b组细胞凋亡率比较,有统计学差异(p0.05),且b组细胞凋亡率低于a组;b组、c组、d组、e组的细胞凋亡率比较,有统计学差异(p0.05),且随着重组人il-37浓度增加,各组细胞凋亡率增高;12h和24h时c组与d组、e组的细胞凋亡率比较均有统计学差异(p0.05),d组与e组的细胞凋亡率比较均无统计学差异(P0.05);而48h时C组、D组、E组的细胞凋亡率比较均无统计学差异(P0.05)。相同药物浓度组各时间点的比较,结果显示各药物浓度组在各时间点之间的细胞凋亡率的比较均有统计学差异(P0.05),且随着培养时间延长,各组细胞凋亡率也增加。3.对人LX2-HSC表达Col-I、Col-III的影响:各时间点A组与B组的Col-I及Col-III浓度比较,有统计学差异(P0.05),且B组的浓度高于A组;B组、C组、D组、E组的Col-I及Col-III浓度比较,有统计学差异(P0.05),且随着重组人IL-37浓度增加,各组细胞表达Col-I、Col-III的浓度减少,但重组人IL-37干预的C组、D组、E组表达的Col-I、Col-III的浓度无统计学差异(P0.05)。各药物浓度组各时间点之间的比较结果显示均无统计学差异(P0.05),即本实验所设置的培养时间内人LX2-HSC所表达的Col-I、Col-III的浓度还未呈现出统计学差异。结论:1.5ng/ml TGF-β1可促进人LX2-HSC增殖、促进人LX2-HSC表达Col-I和Col-III。2.重组人IL-37可抑制TGF-β1活化的人LX2-HSC的增殖。3.重组人IL-37可促进TGF-β1活化的人LX2-HSC凋亡。4.重组人IL-37可抑制TGF-β1活化的人LX2-HSC表达Col-I、Col-III。总之本实验研究表明重组人IL-37可能通过抑制活化的人LX2-HSC增殖、促进其凋亡及抑制其表达Col-I、Col-III而发挥抗肝纤维化作用。
【关键词】：重组人白细胞介素-37 转化生长因子-β1 肝星状细胞 细胞增殖 细胞凋亡
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-10
• 前言10-14
• 材料与方法14-25
• 结果25-39
• 讨论39-46
• 结论46-47
• 参考文献47-51
• 英汉缩略词对照表51-52
• 致谢52-54
• IL-37抗肝纤维化作用研究进展（综述）54-63
• 参考文献60-63

【参考文献】

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1 Ashley M Lakner;Cathy C Moore;Alyssa A Gulledge;Laura W Schrum;;Daily genetic profiling indicates JAK/STAT signaling promotes early hepatic stellate cell transdifferentiation[J];World Journal of Gastroenterology;2010年40期

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本文编号：937265