SIRT3在HBx介导的氧化应激反应中的作用

发布时间：2017-09-30 18:04

  本文关键词：SIRT3在HBx介导的氧化应激反应中的作用

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【摘要】：目的:研究沉默信息调节因子3(SIRT3)在乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白介导的氧化应激反应中的重要作用。方法:1.利用荧光探针carboxy-H2DCFDA和流式细胞术检测HBV瞬时表达和HBV稳定复制的细胞中活性氧自由基(ROS)的水平,验证HBV对细胞氧化应激反应的诱导作用。2.利用荧光探针carboxy-H2DCFDA和流式细胞术检测过表达HBx突变型HBV和过表达HBx对细胞中活性氧自由基(ROS)水平的影响,探讨HBx在氧化应激反应中的作用。3.利用Western blot、q RT-PCR检测分析HBV、HBx对SIRT3蛋白质和mRNA表达水平的影响,并进一步利用双荧光素酶报告系统分析HBV/HBx对SIRT3启动子活性的调控作用。4.Western blot验证HBx、SIRT3的过表达,通过荧光探针carboxy-H2DCFDA和流式细胞术检测细胞内ROS的水平,GSH/GSSG检测试剂盒检测细胞内GSH与GSSG的比例来分析SIRT3对HBV、HBx诱导的氧化应激反应的影响。5.细胞免疫荧光、westernblot检测hbx对细胞dna损伤标志物γ-h2ax形成的影响;dna损伤定量试剂盒检测hbx对氧化损伤的ap位点形成的影响;并通过检测γ-h2ax和ap位点进一步分析sirt3在hbx导致的氧化损伤中的作用;mts和流式细胞术分别分析在氧化应激条件下hbx对细胞存活率和细胞凋亡的影响,并进一步分析sirt3在其中的保护作用。6.real-timepcr、southernblot检测氧化剂h2o2诱导的氧化应激反应对hbv复制水平的影响;real-timepcr、southernblot检测抗氧化剂nac抑制的氧化应激反应对hbv复制水平的影响;real-timepcr、southernblot分析sirt3对h2o2促进hbv复制的影响。结果:1.hbv稳定复制细胞和hbv瞬时表达的细胞中活性氧自由基的水平明显增高。2.hbv基因组中hbx突变能明显降低hbv对氧化应激反应的诱导作用,hbx过表达可显著诱导细胞的氧化应激反应。3.hbx下调sirt3的mrna、蛋白质表达水平;hbx明显抑制sirt3的启动子活性。4.sirt3拮抗hbx引起细胞活性氧自由基水平增加和gsh/gssg比例失衡。5.hbx表达增加了γ-h2ax和ap位点的形成,sirt3过表达减弱hbx对γ-h2ax和ap位点形成的促进作用;氧化应激条件下hbx表达降低了细胞存活率,诱导了细胞凋亡,SIRT3过表达减弱了HBx对细胞存活和凋亡的影响。6.氧化剂H2O2促进HBV的复制;抗氧化剂NAC抑制HBV的复制;SIRT3能够拮抗氧化剂H2O2对HBV复制的促进作用。结论:SIRT3减弱HBx介导的氧化应激对宿主细胞造成的氧化损伤,并同时能减弱氧化应激对HBV复制的促进作用。
【关键词】：SIRT3 HBx 氧化应激
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-16
• 1 材料与方法16-43
• 1.1 材料16-25
• 1.2 方法25-43
• 2 结果43-62
• 2.1 HBV诱导细胞内氧化应激反应43-46
• 2.2 HBx是重要的氧化应激诱导蛋白46-49
• 2.3 HBV/HBx下调SIRT3 的表达水平49-53
• 2.4 SIRT3 拮抗HBx诱导的氧化应激反应53-55
• 2.5 SIRT3 拮抗HBx诱导的氧化损伤55-58
• 2.6 SIRT3 通过氧化应激调控HBV的复制58-62
• 讨论62-66
• 全文总结66-67
• 参考文献67-72
• 文献综述72-82
• 参考文献77-82
• 致谢82-83
• 攻读学位期间发表的学术论文83

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：949608