乙肝耐药患者血清microRNA差异表达的研究

发布时间：2017-10-06 14:33

  本文关键词：乙肝耐药患者血清microRNA差异表达的研究

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【摘要】：目的:探讨micro RNA(mi RNA)在HBV感染者与健康者,耐药突变者与无突变敏感者血清中的差异表达,判断mi RNA用于乙肝耐药突变的诊断价值。方法:首先,我们根据权威文献报道筛选出与乙肝感染相关性最高的两种mi RNA——mi R-122-5p和mi R-125b-5p,收集乙肝感染且HBV-DNA定量5.00×102IU/ml(本研究所采用的试剂盒HBV-DNA最低检出限为5.00×102IU/ml)的入院患者49名的血清样本作为实验组,实验组样本均来自于四川省泸州医学院附属医院。于四川省泸州医学院附属医院体检中心筛选健康体检者21名的血清样本作为对照组,对照组纳入标准为HBV-DNA定量5.00×102IU/ml且乙肝两对半定量检测全在正常参考范围内。所有实验对象无其它类型肝炎病毒的感染,排除酒精性肝病、自身免疫性肝病、代谢性肝病、药物性肝病、隐源性肝病、血吸虫性肝病、遗传性肝病等;无肾脏、血液肿瘤等可能会影响血清水平的疾病,并且无血液制品输注史;入院后经CT或B超检查排除肝癌的可能;然后,我们提取实验组血清HBV-DNA和所有样本血清总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,检测RNA的OD值以判断其纯度,检测结果表明所提取的RNA质量良好,无污染,无降解,符合后续实验要求。接着我们利用反向点杂交法检测实验组的乙肝耐药突变,检测得到实验组耐药突变结果分为rt204I、rt204V、rt L180M、rt204V+rt L180M以及未突变的“野生型”五类。最后,我们以cel-mi R-39-3p为外参,检测宿主mi R-122-5p和mi R-125b-5p的相对表达水平(我们委托广州锐博生物技术有限公司对所有引物进行合成、纯化和鉴定),检测结果通过SPSS17.0软件进行统计分析,探讨:1.患者感染HBV是否影响mi R-122-5p和mi R-125b-5p的表达水平;2.耐药突变的出现是否影响mi R-122-5p和mi R-125b-5p的表达水平3.年龄是否影响mi R-122-5p和mi R-125b-5p的表达水平。结果:1.表3中耐药突变组和无突变野生组mi R-122-5p和mi R-125b-5p的均数M均大于健康对照组的M值,表4中,HBV感染组VS健康对照组,mi R-122-5p和mi R-125b-5p的P值均0.01,差异具有统计学意义,由此说明患者感染HBV后mi R-122-5p和mi R-125b-5p的值将显著升高;2.表3中,耐药突变组mi R-122-5p和mi R-125b-5p的均数M均大于无突变野生组的M值,表4中,耐药突变组VS无突变野生组,mi R-122-5p和mi R-125b-5p的P值均0.01,差异具有统计学意义,由此说明,耐药突变的出现将导致mi R-122-5p和mi R-125b-5p的值显著升高;3.从散点图图6~图11中可以看出,无论是HBV耐药突变组还是无突变野生组,亦或是健康对照组,年龄的变化与mi R-122-5p和mi R-125b-5p的相对定量值成正相关,0γ1,由此说明,随着年龄的增长,mi R-122-5p和mi R-125b-5p的值有升高的趋势。结论:综上所述,mi RNA不仅可用于诊断HBV感染,还可用于诊断乙肝耐药突变,此外,我们还发现随着年龄的增长,mi R-122-5p和mi R-125b-5p的值有升高的趋势。这为临床诊断HBV感染提供了又一新的依据,将有助于临床诊断乙肝耐药,协助改善临床的治疗策略。
【关键词】：microRNA 乙型肝炎 耐药 血清
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62;R446.6
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-15
• 材料与方法15-24
• 实验结果24-35
• 讨论35-43
• 结论43-44
• 参考文献44-48
• 英汉缩略词对照表48-49
• 致谢49-51
• 丙型肝炎相关微小RNA的研究进展（综述）51-64
• 参考文献58-64

【共引文献】

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 王星果;鸡肝脏和骨骼肌miRNA表达和功能研究[D];扬州大学;2013年

2 彭米林;HIV Vpr通过上调miR-122表达促进丙型肝炎病毒RNA复制及其蛋白合成[D];中南大学;2014年

3 杨宗兴;HIV感染者/艾滋病患者microRNAs表达谱分析及其影响HIV感染的机制研究[D];浙江大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 屠蕴秋;基于纳米材料荧光淬灭作用的microRNA检测新方法研究[D];南京师范大学;2013年

2 李倩倩;miR-370对肝细胞癌的作用及其临床意义[D];第二军医大学;2013年

3 马力;MiR-1236抑制VprBP翻译调节HIV-1复制研究及HIV-1感染后长期不发病中国人群基因多态性分析[D];苏州大学;2014年

4 施文彩;肝细胞核因子4α调控hepcidin的细胞实验研究[D];第二军医大学;2014年

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本文编号：983320