年龄因素与大鼠急性酒精性肝损伤的相关性及骨髓间充质干细胞对急性酒精性肝损伤保护作用的初步研究

发布时间：2017-10-08 01:23

  本文关键词：年龄因素与大鼠急性酒精性肝损伤的相关性及骨髓间充质干细胞对急性酒精性肝损伤保护作用的初步研究

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【摘要】：背景及目的:过量饮酒可引起多器官损伤,其中以肝脏损伤最为显著。酒精性肝病(alcohol liver disease,ALD)是导致终末期肝病的主要原因之一。酒精性肝病日益成为全球肝病致死的第一大原因。随着酒精消费向低龄化高龄化的发展,给各年龄阶段的群体带来深远的影响。由于不同年龄阶段肝脏功能的差异,我们假设不同年龄阶段酒精所引起的肝损伤的程度也应该有所差异,并设计不同年龄阶段大鼠的动物模型实验,来研究年龄因素与酒精性肝损伤的相关性。随着对自身干细胞的研究,我们拟通过静脉注射自身骨髓间充质干细胞,初步研究干细胞对酒精性肝损伤的保护作用及可能机制。本研究探讨以下问题:(1)年龄因素与急性酒精性肝损伤和肝细胞凋亡的相关性;(2)初步探讨BMSC对酒精性肝损伤的保护作用及相关机制。方法:1.月龄为1、6、18月的SD大鼠每组各15只,随机分成实验组(n=10)和对照组(n=5),实验组每只大鼠以15g/kg 40%乙醇一次性灌胃,对照组以等比例生理盐水一次性灌胃。灌胃48 h后取大鼠血液和肝脏组织分别行肝功能和ELISA检测肝脏炎症因子表达及TUNEL检测肝细胞凋亡情况。并进一步研究酒精刺激后肝细胞中Bcl-2、Bax、Caspase3等在凋亡通路中的表达情况,研究年龄因素与急性酒精性肝损伤和肝细胞凋亡的相关性及可能机制。2.取200-220g的雄性SD大鼠90只,随机分成空白组、对照组、BMSC治疗组(n=30)。其中对照组和BMSC治疗组每只大鼠以15 g/kg 40%乙醇一次性灌胃,灌胃12小时后,BMSC治疗组从大鼠尾静脉注入1ml含有5×10~6BMSC细胞量的生理盐水,对照组从大鼠尾静脉注入1ml生理盐水。在鼠尾静脉注射1天、3天、7天后分别取大鼠的血液和肝脏组织行肝功能、肝脏炎症因子及细胞凋亡情况的研究。分别从大鼠大体情况,存活率,肝功能,炎症因子及肝细胞凋亡角度观察BMSC对大鼠酒精性肝损伤的保护作用并初步探讨可能机制。结果:1.对照组及不同年龄组间肝功能、炎症指标无显著差异(P0.05),1月龄组和6月龄组的肝细胞凋亡率无明显差异,18月龄组显著高于其他两组(P0.05)。实验组内不同年龄组的肝功能、炎症因子表达和肝细胞凋亡率均显著高于对照组(P0.05)。且不同年龄组间存在差异:实验组6月龄组的炎症因子表达显著高于其他各组(P0.05)。而实验组内1月龄组的大鼠细胞凋亡率最高,6月龄组次之,18月龄组最低,各组间差异显著(P0.05)。进一步研究显示Bcl-2、Bax、Caspase3在不同年龄实验组中表达不同,其中Bax、Caspase3的表达1月龄组最高,6月龄次之,18月龄组最低,各组间差异显著(P0.05),而Bcl-2的表达则趋势相反,且各组间差异有统计学意义(P0.05)。2.对照组、BMSC治疗组与空白组相比,大鼠活动度降低,存活率降低,而肝功能指标、炎症因子及细胞凋亡率均有显著的增高(P0.05)。BMSC治疗组与对照组相比,存活率显著增高(P0.05),在BMSC治疗后的第1天及第3天时血液肝功能指标、炎症因子及细胞凋亡情况均显著好转(P0.05)。第7天时各组肝功能、炎症因子及细胞凋亡较第1天和第3天均有所好转。结论:1.生理状态下,肝功能、炎症因子与年龄因素无显著相关性,肝细胞凋亡率在老年时有所增加。急性过量饮酒可引起肝脏损伤和凋亡,且损伤程度、凋亡率与年龄呈一定相关性:以40%乙醇15g/kg剂量一次性灌胃,48小时后,6月龄组大鼠肝脏损伤最重,而1月龄组肝细胞凋亡率最高。表明一次性过量饮酒可引起肝脏损伤和肝细胞凋亡,其程度因鼠龄差异而表现不同。这可能与不同年龄大鼠在酒精刺激下肝脏炎症细胞的激活量及肝细胞凋亡通路的激活不同有关。2.酒精性肝病可引起大鼠肝功能、炎症因子及细胞凋亡的显著增加;大鼠的肝脏具有很强的自我修复能力,酒精性肝损伤1周后,各组肝功能及炎症因子等各项指标均有所恢复。而静脉注射BMSC可以提高酒精性肝损害的早期存活率,并从降低肝组织炎症反应及细胞凋亡方面起到对肝脏损伤的保护作用。
【关键词】：急性酒精性肝病 年龄相关 BMSC 肝功能 炎症因子 凋亡
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 缩略词表10-11
• 前言11-18
• 参考文献15-18
• 第一部分 年龄因素与大鼠急性酒精性肝损伤相关性的研究18-34
• 一、材料和方法19-23
• 二、实验结果23-28
• 三、讨论28-30
• 四、小结30-31
• 参考文献31-34
• 第二部分 大鼠BMSC细胞的分离、培养及鉴定34-44
• 一、材料和方法34-37
• 二、实验结果37-40
• 三、讨论40-41
• 四、小结41-42
• 参考文献42-44
• 第三部分 BMSC对大鼠急性酒精性肝损伤保护作用的初步研究44-60
• 一、材料和方法44-48
• 二、实验结果48-55
• 三、讨论55-57
• 四、小结57-58
• 参考文献58-60
• 全文总结60-61
• 综述 酒精性肝病与炎症因子61-73
• 参考文献67-73
• 硕士在读期间发表论文和参加科研工作情况73-74
• 致谢74

【参考文献】

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本文编号：991214