PRMT2对AngⅡ诱导VSMC增殖的调控作用及其机制研究

发布时间：2017-04-05 00:12

  本文关键词：PRMT2对AngⅡ诱导VSMC增殖的调控作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：蛋白质精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)是蛋白质精氨酸甲基转移酶家族成员之一,通过甲基化蛋白质氨基酸序列中的精氨酸残基参与调控机体多种细胞过程。最近有研究发现PRMT2可能在心血管疾病中发挥重要作用,PRMT2基因敲除小鼠与正常小鼠相比,在给予病理因素干扰后出现明显的血管壁增厚、血管内膜增生、血管平滑肌细胞(VSMC)增殖现象。VSMC异常增殖是多种心血管疾病共同的病理特征,常伴随心血管疾病发病进程出现。引起VSMC异常增殖的诱因众多,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)则是诱导VSMC异常增殖的主要生物活性因子之一,AngⅡ可通过诱导血管内炎症反应发生引起血管结构炎性改变,促进VSMC转型、增殖。大量文献报道,PRMT2在各种炎症模型中表达均有显著变化,PRMT2抑制炎症反应引起的细胞凋亡,影响炎症反应经典信号通路NF-κB激活。研究发现NF-κB抑制蛋白(IκB-α)可能是PRMT2作用底物之一,我们推测PRMT2可能通过作用于IκB-α影响NF-κB信号通路及VSMC增殖。基于此,本课题将深入探讨PRMT2在AngⅡ诱导VSMC增殖中的作用及其作用机制。第一部分:AngⅡ对VSMC细胞内PRMT2表达的影响目的:观察AngⅡ对VSMC细胞内PRMT2表达的影响实验方法:用不同浓度(0、0.01、1、100n M)AngⅡ处理人主动脉血管平滑肌细胞不同时间(0、6、12、24h),MTT法检测细胞增殖率、Western blot检测PRMT2、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达量的变化,RT-PCR检测PRMT2 m RNA的表达水平。结果:血管平滑肌细胞增殖率、PCNA蛋白表达量随AngⅡ处理浓度增加而增加,PRMT2 m RNA、蛋白表达水平随AngⅡ处理浓度增加而降低(P0.05);血管平滑肌细胞增殖率、PCNA蛋白表达量随AngⅡ处理时间增加而增加,PRMT2 m RNA、蛋白表达水平随AngⅡ处理浓度、时间增加而降低(P0.05)。小结:AngⅡ浓度、时间依赖性下调VSMC中PRMT2的m RNA、蛋白表达。第二部分:PRMT2对AngⅡ诱导VSMC增殖的影响目的:明确PRMT2在AngⅡ诱导VSMC增殖过程中的作用实验方法:构建PRMT2过表达载体,设立空载体(vector)组、AngⅡ处理组、AngⅡ+PRMT2组;利用si RNA技术沉默PRMT2基因,设立阴性对照(NC)组、AngⅡ处理组、si PRMT2组、AngⅡ+si PRMT2组,MTT、流式细胞术检测各组细胞增殖率和周期变化,Western blot法检测PRMT2、PCNA表达量。结果:与AngⅡ组相比,AngⅡ+PRMT2组G0/G1期比例增加(P0.05),细胞增殖率降低、S期比例下降、PCNA表达量减少(P0.05),过表达PRMT2可减弱AngⅡ诱导VSMC增殖的作用;si PRMT2组细胞增殖率、PCNA表达量及周期分布与NC组比较均无明显变化,表明仅仅沉默PRMT2基因对VSMC增殖状态无显著影响;AngⅡ+si PRMT2组与AngⅡ组相比,PRMT2表达量下降(P0.05),细胞增殖率增加(P0.05),PCNA表达量、周期分布也有所增加,但无统计学意义,表明沉默PRMT2基因在一定程度上进一步增强Ang II诱导VSMC增强的作用。小结:PRMT2抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖。第三部分:PRMT2影响VSMC增殖的机制目的:探讨PRMT2影响VSMC增殖的机制实验方法:免疫荧光法检测vector组、AngⅡ处理组、AngⅡ+PRMT2组NF-κB亚基p65细胞核内外分布,Western blot检测各组炎症因子IL-1β、IL-6表达量以及IκB-α总蛋白量、磷酸化水平,免疫共沉淀法验证PRMT2和IκB-α的相互作用,ELISA法检测各组培养基中甲基化产物ADMA含量。结果:与vector组比较,AngⅡ处理组细胞核内p65荧光信号强度明显增强,IL-1β、IL-6表达量增加(P0.05),而与AngⅡ组比较,AngⅡ+PRMT2组核内p65荧光强度显著减弱,IL-1β、IL-6表达量减少(P0.05),表明PRMT2可有效阻碍p65向核内转移,抑制NF-κB激活及炎症因子表达;免疫共沉淀结果显示PRMT2与IκB-α之间存在相互结合,PRMT2可能是通过作用于IκB-α影响了NF-κB从细胞质向核内转移;与vector组比较,AngⅡ组IκB-α总蛋白量减少、磷酸化水平上调,ADMA含量减少(P0.05),AngⅡ+PRMT2组与AngⅡ组相比,IκB-α总蛋白量增加、磷酸化水平下降,ADMA含量增加(P0.05),PRMT2可能是通过甲基化IκB-α阻碍IκB-α磷酸化及降解,抑制NF-κB激活及炎症反应发生,影响VSMC增殖。小结:PRMT2可能通过甲基化IκB-α阻断NF-κB信号通路、抑制AngⅡ诱导VSMC增殖结论:1.PRMT2可能在AngⅡ诱导VSMC增殖中起负调控作用。2.PRMT2可能通过甲基化IκB-α抑制NF-κB信号通路,从而负调控AngⅡ诱导的VSMC增殖。
【关键词】：蛋白质精氨酸甲基转移酶2 血管紧张素Ⅱ 血管平滑肌细胞 NF-κB IκB-α
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要4-8
• Abstract8-15
• 专业名词缩写中英文对照表15-16
• 第1章 绪论16-20
• 第2章 材料20-22
• 2.1 主要试剂20-21
• 2.2 主要仪器21-22
• 第3章 主要方法22-30
• 3.1 人主动脉平滑肌细胞的培养及瞬时转染22
• 3.2 MTT法检测细胞增殖率22-23
• 3.3 免疫共沉淀法（co-IP）检测蛋白之间的相互作用23-24
• 3.4 Western blot法检测蛋白表达24-25
• 3.5 RT-PCR法检测mRNA的表达25-27
• 3.6 流式细胞术检测细胞生长周期27
• 3.7 免疫荧光法检测NF-κB亚基p65蛋白分布27
• 3.8 ELISA法检测ADMA含量27-28
• 3.9 统计学分析28-30
• 第4章 实验结果30-42
• 4.1 AngⅡ浓度、时间依赖性促进VSMC增殖30-31
• 4.2 AngⅡ使VSMC内PRMT2 mRNA和蛋白表达下调31-32
• 4.3 过表达PRMT2可抑制AngⅡ诱导VSMC增殖32-35
• 4.4 PRMT2-siRNA沉默PRMT2基因对AngⅡ诱导VSMC增殖的影响35-38
• 4.5 PRMT2抑制AngⅡ诱导的NF-κB信号通路激活38-39
• 4.6 PRMT2可能通过甲基化IκB-α抑制NF-κB信号通路激活39-42
• 第5章 讨论42-46
• 5.1 AngⅡ诱导VSMC增殖模型构建42-43
• 5.2 AngⅡ对VSMC内PRMT2表达的影响43
• 5.3 PRMT2对AngⅡ诱导VSMC增殖过程的影响43
• 5.4 PRMT2影响VSMC增殖的机制43-46
• 第6章 结论46-48
• 参考文献48-54
• 文献综述 精氨酸甲基转移酶2的研究进展54-65
• 参考文献62-65
• 科研成果65-66
• 致谢66

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 赵乃坤;;用长春新碱和流式细胞仪计算细胞增殖率——Ⅱ老年腹水肿瘤细胞增殖率和S期细胞数之间的关系。[J];国外医学(肿瘤学分册);1980年06期

2 类春燕;沈秀华;张乃宁;丛峰松;马俐君;宋立华;;Genistein对受辐射L-02人肝细胞增殖和DNA损伤的影响[J];第二军医大学学报;2012年04期

3 吴文宇;唐东昕;陆璐;田伟;;人参对人脐静脉内皮细胞增殖的影响[J];贵阳中医学院学报;2012年06期

4 詹杰;刘永林;柳承希;魏树和;张静生;;冠心康对镉染毒人脐静脉内皮细胞功能的影响[J];辽宁中医杂志;2011年07期

5 ;[J];;年期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 骆镜妃;PRMT2对AngⅡ诱导VSMC增殖的调控作用及其机制研究[D];南华大学;2016年

  本文关键词：PRMT2对AngⅡ诱导VSMC增殖的调控作用及其机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：286147