氧化低密度脂蛋白通过Akt/mTOR/p70S6K途径诱导内皮细胞自噬

发布时间：2022-02-20 19:51

　　研究目的:自噬是一个在生物进化上相对保守的过程,涉及长寿蛋白的降解;它在细胞的生长、发育、稳态平衡中发挥了重要的作用。氧化应激可以诱导自噬活动的发生,从而促进细胞内受损及有害物质的降解。在我们的研究中,主要探讨氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）自噬中的作用及其对Akt/m TOR/p70S6K信号通路的影响。研究方法:传代培养HUVECs,选用透气的细胞培养瓶、DMEM培养基（含10%胎牛血清+100U/ml青霉素和100U/ml链霉素）,细胞呈现出贴壁生长状态,放置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养,24小时后换液继续培养,并注意观察细胞生长情况,约两天传一代,选用第四代HUVECs,以10*10^4/ml的细胞密度接种于六孔板中,每个孔内接种2ml,然后取对数生长期的细胞,将培养的HUVECs分为ox-LDL组和对照组,分别加入100ug/ml ox-LDL和等体积的磷酸盐缓冲液（PBS）,培养6h、12h后,收集细胞,应用透射电子显微镜观察自噬体,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）方法检测LC3、p62 m RNA表达水... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
实验材料
    1.1 实验细胞
    1.2 主要试剂
    1.3 主要仪器
    1.4 液体及试剂配制
实验方法
    2.1 细胞培养及分组
        2.1.1 细胞培养
        2.1.2 分组
    2.2 细胞复苏和冻存
        2.2.1 细胞复苏
        2.2.2 细胞冻存
    2.3 细胞传代
    2.4 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MRNA表达
        2.4.1 细胞总RNA的trizol法提取
        2.4.2 将总RNA从样品逆转录成cDNA
        2.4.3 实时定量RT-PCR
    2.5 细胞蛋白的提取、定量及WESTERN-BIOTTING检测
        2.5.1 细胞总蛋白的提取
        2.5.2 配制浓缩胶和分离胶
        2.5.3 上样及SDS-PAGE凝胶电泳
        2.5.4 转膜
        2.5.5 封闭
        2.5.6 孵育抗体
        2.5.7 显色
        2.5.8 条带分析
    2.6 透射电镜观察
    2.7 统计学方法
实验结果
    3.1 OX-LDL诱导HUVECS自噬的电镜表现
    3.2 OX-LDL对HUVECS中LC3、P62表达的影响
    3.3 OX-LDL对HUVECS中AKT/MTOR/P70S6K信号通路表达的影响
讨论
结论
参考文献
综述
    综述的参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]自噬与心肌缺血/再灌注损伤[J]. 刘友斌,杨树森,樊瑛,甘润韬.  中国病理生理杂志. 2009(12)
[2]氧化型低密度脂蛋白与动脉粥样硬化研究进展[J]. 王建礼,徐兴华,林娜.  医学综述. 2009(09)



本文编号：3635708