心脏发育相关蛋白TMP3在细胞中表达的分布研究

发布时间：2022-02-23 23:17

　　心脏发育过程十分复杂,人们在研究心脏病的发病机理过程中,对其中的一些难题已有了初步的解决方法和成效。但仍有许多问题亟待研究。通过鉴定心脏发育相关的调控因子,鉴定出与其相互作用的蛋白,发现其参与的信号通路,是研究基因功能的有效手段。阐明基因的分子调控机制将为研究清楚心脏发育的机制及心脏病的诊断等方面提供理论指导。本实验室前期已克隆出人和斑马鱼TMP3基因的DNA全长,证明TMP3是一个膜蛋白,在心脏中高表达,敲低斑马鱼TMP3基因导致心脏畸形。同时证明TMP3与转运蛋白TMPA4具有相互作用。通过分离膜、核、质蛋白的CO-IP实验,发现两者在细胞质和细胞核发生相互作用,提示TMP3蛋白入核,其入核过程可能需要转运蛋白TMPA4的协助。生物信息学分析表明,TMP3基因免疫印记编码的蛋白大小为35kd左右。我们通过免疫印记实验表明,TMP3蛋白大小约57kd。我们猜测,TMP3作为膜蛋白可能通过某些修饰作用而增加蛋白质的大小。我们取成体斑马鱼的心脏,分别提取细胞质、细胞核与细胞膜蛋白,检测TMP3蛋白的表达分布情况。结果表明,在细胞质和细胞膜中有35kd和57kd两种大小的TMP3蛋白,细胞... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省211工程院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
目录
第一章 引言
    1.1 斑马鱼简介
    1.2 斑马鱼心脏发育过程
    1.3 转录因子调控脊椎动物心脏的早期发育
        1.3.1 NK-2同源异性因子
        1.3.2 锌指蛋白GATA转录因子
        1.3.3 其它因子对心脏早期发育的调控
    1.4 TMP基因家族
    1.5 TMPA4简介
    1.6 泛素化
    1.7 蛋白糖基化
    1.8 蛋白的SUMO化
    1.9 本文的研究意义
第二章 材料与方法
    2.1 材料、试剂与设备
        2.1.1 酶类和试剂盒
        2.1.2 菌株和质粒
        2.1.3 其他试剂
        2.1.4 主要实验仪器
        2.1.5 生物信息学分析的主要软件与数据库
    2.2 用到的生物学实验方法
        2.2.1 组织样品总RNA的提取步骤
        2.2.2 RNA甲醛变性胶电泳
        2.2.3 PCR反应
        2.2.4 PCR产物的纯化回收
        2.2.5 感受态细胞的制备
        2.2.6 转化(热休克法)
        2.2.7 质粒的小量制备
        2.2.8 阳性克隆的筛选与鉴定
        2.2.9 测序
        2.2.10 蛋白的提取
        2.2.11 核质膜蛋白的提取
        2.2.12 酵母双杂交(Two Hybrid System)
        2.2.13 免疫共沉淀(CO-IP)
        2.2.14 SDS-PAGE
        2.2.15 Western blot
第三章 结果与分析
    3.1 TMP3基因在成体斑马鱼各组织中的表达检测
    3.2 TMP3基因的亚细胞表达定位的分析
        3.2.1 TMP3和TMPA4相互作用的亚细胞定位分析
        3.2.2 TMP3在H9C2中的亚细胞表达
        3.2.3 TMP3在成体斑马鱼心脏细胞中的亚细胞定位表达分析
    3.3 TMP3蛋白的糖基化检测
    3.4 TMP3敲除斑马鱼在蛋白水平上的检测
第四章 其它工作
    4.1 FOXP4抑制NKX2.5的表达
    4.2 FBXL5和FOXP4泛素化相关性的检测
    4.3 多克隆抗体的制备
        4.3.1 基因克隆及载体构建
        4.3.2 融合蛋白Nfatc3的诱导表达
        4.3.3 Nfatc3融合蛋白表达纯化
        4.3.4 Nfatc3多克隆抗体的制备
        4.3.5 Nfatc3多克隆抗体的检测
        4.3.6 结果
第五章 结语与讨论
参考文献
附录1
附录2
后记


【参考文献】：
期刊论文
[1]小泛素相关修饰物SUMO研究进展[J]. 陈泉,施蕴渝.  生命科学. 2004(01)
[2]锌指亚家族GATA-4、-5和-6的调控作用[J]. 肖婧,王跃群,吴秀山.  生命科学研究. 2003(S1)



本文编号：3641489