靶向干扰Kv1.3通道基因介导的Treg细胞活化与逆转心肌纤维化机制研究

发布时间：2022-06-03 21:55

　　目的:探讨由Kv1.3通道基因介导的Treg细胞活化与心肌成纤维（CFs）细胞间的相互作用关系,明确Kv1.3通道基因在Treg细胞活化并促进心肌纤维化过程中的关键地位。方法通过基因工程方法构建靶向RNA干扰（RNAi）KCNA3（Kv1.3）基因的慢病毒载体,体外转染Treg细胞后与CFs共培养,RT-qPCR法和全细胞膜片钳法检测转染Treg细胞基因沉默效率;ELISA法检测共培养细胞分泌因子的变化;CCK-8法检测共培养体系细胞的增殖变化;In cell western法检测共培养体系Treg细胞上的Kv1.3通道蛋白的表达。结果:1.成功构建基因干扰的慢病毒载体并转染Treg细胞:与正常组相比,沉默组Treg细胞Kv1.3 mRNA表达明显降低（P<0.01）,抑制率为78.0%;与正常组相比,沉默组Treg细胞Kv1.3钾通道+40mV的峰值电流密度明显降低（P<0.01）,其抑制率为71.3%;2.CCK-8实验表明:CFs+Tregs组较CFs组增殖最明显（P<0.01）;CFs+Tregs+EPL组较CFs+Tregs组增殖明显降低（P<0.01... 

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
研究内容与方法
    1 研究对象
        1.1 CD4~+CD25~+Treg细胞
        1.2 共培养体系纤维化研究
    2 实验仪器与设备
        2.1 仪器和设备
        2.2 药品与试剂
    3 相关实验试剂配置
        3.1 PBS缓冲液的配置
        3.2 细胞因子(IL-2,TGF-β)溶解稀释
        3.3 完全培养基的配置
        3.4 免疫磁珠分选缓冲溶液配置
        3.5 全细胞膜片钳记录Kv1.3钾离子通道电流相关溶液配置
        3.6 依普利酮的配置
        3.7 转染试剂稀释及配置
        3.8 In Cell Western实验相关试剂的配置
    4 实验方法
        4.1 CD4~+CD25~+Treg细胞
        4.2 CD4~+CD25~+Treg细胞体外刺激活化
        4.3 使用慢病毒系统包装Kv1.3基因转染目的细胞
        4.4 实时定量PCR检测目的细胞Kv1.3通道基因m RNA
        4.5 全细胞膜片钳检测正常组及转染组电流密度
        4.6 SD大鼠乳鼠CFs的分选
        4.7 构建Treg细胞与CF细胞体外共培养模型
    5 统计方法
    6 技术路线图
结果
讨论
小结
致谢
参考文献
综述 心肌纤维化的发病机制与研究进展
    参考文献
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导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
[1]CD4+CD25highCD127low调节性T细胞促进上皮性卵巢癌转移机制的初步探讨[J]. 柯星,张良,沈立松.  检验医学. 2019(02)
[2]siRNA药物研究进展[J]. 贺婉红,薛嫚,李芳,俸灵林,张婷.  中国药学杂志. 2018(14)
[3]依普利酮基于阻断Kv1.3通道对抗Treg细胞体外促成纤维细胞增殖作用[J]. 邵培培,徐琦,李少华,程路峰.  中国药理学通报. 2017(11)
[4]细胞共培养模型及其在中枢神经系统疾病研究中的应用[J]. 杨盛,何然,张飞燕,薛强,徐晓玉.  药学学报. 2016(03)
[5]炎症免疫反应软调节[J]. 魏伟.  中国药理学通报. 2016(03)
[6]慢性心衰大鼠CD4+ CD25+ Treg细胞Kv1.3钾通道电流变化[J]. 刘长江,武洋,李少华,邵培培,程路峰.  新疆医科大学学报. 2016(02)
[7]心肌纤维化的发病机制及其研究进展[J]. 于瑞,王幼平,崔琳,李彬,谢世阳,高原,王新陆,朱明军.  中国现代医生. 2015(13)
[8]心肌纤维化发病机制及治疗进展[J]. 宋秉春,张金国.  济宁医学院学报. 2015(01)
[9]参附注射液治疗慢性心力衰竭研究进展[J]. 侯鹏高,吕长淮.  齐齐哈尔医学院学报. 2014(08)
[10]转化生长因子β1与心肌纤维化的研究进展[J]. 杨锦龙,范忠才.  医学理论与实践. 2014(08)



本文编号：3653549