自噬/线粒体自噬在锌诱导的抗心肌细胞缺氧/复氧损伤保护中的作用

发布时间：2023-02-14 20:36

　　目的1.观察ZnCl₂是否通过诱导自噬/线粒体自噬来减轻心肌细胞缺氧/复氧引起的活性氧(ROS)产生并保护心肌细胞。2.探讨ZnCl₂诱导自噬/线粒体自噬的分子机制。方法建立心肌细胞H9c2缺氧/复氧模型。用透射电镜观察线粒体的结构和功能改变、线粒体自噬泡的形成情况;Western blotting法检测LC3、TOM20、TIM23、COX4、Beclin1、PINK1蛋白表达及ERK、m TOR、AMPK、Bcl-2磷酸化水平;q PCR检测NIX和PINK1 m RNA水平的改变;用免疫荧光法检测GFP-LC3自噬体和TOM20的共定位、Mitotrack Green(MTG)和PINK1的共定位;用线粒体荧光探针JC-1、ROS荧光探针DCFH-DA、线粒体ROS荧光探针Mitosox Red在共聚焦显微镜上分别测定线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,△Ψm)、细胞内总ROS和线粒体ROS水平。结果1.共聚焦显微镜实验结果显示。与正常对照组相比,复氧时细胞和线粒体内的ROS明显增加。用ZnC...

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
缩略语
前言
    研究现状、成果
    目的和方法
一、观察锌离子是否通过诱导自噬/线粒体自噬而减少复氧时线粒体ROS的产生
    1.1 材料和方法
        1.1.1 研究对象
        1.1.2 试验仪器
        1.1.3 常用试剂
        1.1.4 关键试剂
        1.1.5 荧光试剂
        1.1.6 试剂盒
        1.1.7 抗体
        1.1.8 常用试剂配方
        1.1.9 H9c2细胞的复苏、传代和冻存
        1.1.10 建立H9c2细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）模型
        1.1.11 BCA蛋白定量
        1.1.12 细胞计数
        1.1.13 JC-1 染色检测细胞线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential，△Ψm）变化
        1.1.14 DCFH-DA检测总ROS相对含量
        1.1.15 Mitosox Red荧光探针检测线粒体内ROS水平
        1.1.16 透射电子显微镜（Transmission election microscopy，TEM）技术
        1.1.17 质粒转染
        1.1.18 细胞免疫荧光
        1.1.19 Western blotting
        1.1.20 PCR
        1.1.21 CCK8检测细胞活性
        1.1.22 统计学分析
    1.2 结果
        1.2.1 锌降低缺氧/复氧时线粒体ROS的产生
        1.2.2 锌诱导自噬
        1.2.3 锌诱导线粒体自噬
        1.2.4 复氧时锌诱导线粒自噬
        1.2.5 锌通过诱导自噬/线粒体自噬减少缺氧/复氧时线粒体ROS的产生
        1.2.6 锌离子通过诱导自噬/线粒体自噬而引起H9c2抗H/R损伤的保护作用
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、探讨锌诱导自噬/线粒体自噬的机制
    2.1 结果
        2.1.1 锌诱导自噬的分子机制
        2.1.2 锌诱导线粒体自噬的机制
        2.1.3 锌防止线粒体ROS产生的机制
        2.1.4 缺氧/复氧过程中锌通过诱导线粒体自噬而清除损伤的线粒体，减少mPTP的开放
    2.2 讨论
    2.3 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
附录
综述 自噬/线粒体自噬的分子机制及其在心肌缺血/再灌注损伤中的作用
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3742978