脂联素通过调节自噬水平减轻LPS诱导的巨噬细胞炎症损伤的作用及机制

发布时间：2023-03-04 05:06

　　目的:现有的大量流行病学证据肯定了脂联素(adiponectin,APN)的心血管保护作用,包括心肌保护、促血管生成、抗炎、抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)作用。本研究通过建立脂多糖(lipopolysaccharide LPS)诱导巨噬细胞炎症损伤模型,探究APN是否通过调节巨噬细胞自噬水平发挥抗AS作用,进而为临床抗AS治疗提供新思路。方法:1.第一部分,体外培养的RAW264.7巨噬细胞经LPS诱导后,采用Cell Counting Kit(CCK-8)检测细胞的存活率,通过蛋白质印迹方法(Western blot,WB)检测不同作用时间点细胞自噬水平。实验分组:(1)对照组,细胞正常培养,未进行LPS诱导处理;(2)细胞经LPS(100ng/ml)诱导6h;(3)细胞经LPS(100ng/ml)诱导12h;(4)细胞经LPS(100ng/ml)诱导24h。2.第二部分实验,结合第一部分实验的结果选择细胞自噬明显时间点,使用WB方法观察APN对LPS诱导后巨噬细胞自噬水平的影响,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α...

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前言
第一部分 观察LPS诱导后巨噬细胞存活率及自噬水平的变化
    1 材料与方法
        1.1 实验细胞
        1.2 主要试剂及耗材
        1.3 主要仪器
        1.4 主要溶液
        1.5 细胞培养
        1.6 使用CCK-8 检测LPS对巨噬细胞的毒性
        1.7 免疫印迹法测定自噬蛋白表达水平
        1.8 统计分析
    2 结果
        2.1 LPS诱导RAW264.7 后细胞存活率检测
        2.2 LPS诱导RAW264.7 后细胞自噬水平增加
    3 讨论
    4 结论
第二部分 脂联素对LPS诱导RAW264.7 巨噬细胞后炎症水平及自噬水平的影响
    1 材料与方法
        1.1 主要抗体、试剂及耗材
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂配制
        1.4 细胞培养
        1.5 LPS诱导RAW264.7 炎症模型
        1.6 ELISA法检测LPS诱导后RAW264.7巨噬细胞IL-1β，IL-6，TNF-α水平
        1.7 Western blot检测自噬蛋白的表达
        1.8 统计分析
    2 结果
        2.1 脂联素对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞IL-1β，IL-6，TNF-α浓度的影响
        2.2 APN可使LPS诱导后的RAW264.7 后巨噬细胞自噬水平降低
    3 讨论
    4 结论
第三部分 脂联素通过PI3K/Akt/mTOＲ通路影响LPS诱导RAW264.7巨噬细胞的自噬水平
    1 材料与方法
        1.1 主要抗体、试剂及耗材
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂配制
        1.4 细胞培养
        1.5 LPS诱导RAW264.7 炎症模型
        1.6 Western blot检测自噬蛋白、通路蛋白的表达
        1.7 统计分析
    2 结果
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
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本文编号：3753771