Sirt3对心肌梗死后心脏损伤的保护作用机制研究

发布时间：2023-04-02 17:21

　　背景和目的:心肌梗死后心脏损伤的发病机制与线粒体结构功能损害相关,然而心肌梗死后线粒体损伤的上游调节机制尚未明确。在慢性疾病中Sirt3保护线粒体结构功能。因此我们研究的目的是探讨Sirt3在心肌梗死后心脏损伤中对线粒体结构功能作用及其作用机制。方法:选取野生型和Sirt3转基因小鼠为实验对象,建立心肌梗死后心脏损伤的在体模型,使用Western blot、TUNEL染色、ELISA、马松染色、qPCR、超声心动图、心肌细胞功能检测、免疫荧光法、细胞流式技术和JC-1染色等方法,评价模型心肌梗死后心脏损伤程度、线粒体结构和功能受损程度以及相关信号通路蛋白的表达。使用“功能缺失和获得”的方法验证线粒体分裂和AMPK信号通路在Sirt3减轻心肌梗死后心脏损伤中的作用。结果:Sirt3在梗死后心脏损伤的进展中下调。Sirt3的过度表达可减轻心肌纤维化,维持心肌功能,抑制炎症反应,减少心肌细胞死亡。线粒体结构功能性研究表明,心肌梗死后心脏损伤的进程中线粒体分裂增多,引起心肌细胞线粒体氧化应激、代谢紊乱、线粒体电位降低和caspase9凋亡。然而,Sirt3的过度表达减弱了线粒体的分裂,从而维持...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英文缩略词表
摘要
Abstract
前言
第一部分 Sirt3对心肌梗死后心脏损伤表型的影响
    1 研究背景
    2 材料与方法
        2.1 实验动物和分组
        2.2 心肌梗死后心脏损伤在体模型建立
        2.3 心肌细胞分离和培养
        2.4 心肌梗死后心脏损伤体外模型建立和分组
        2.5 在体模型心脏功能检测
        2.6 心脏标本制作和组织学分析
        2.7 心肌细胞功能检测
        2.8 细胞凋亡检测
        2.9 比色法
        2.10 蛋白质印迹分析
        2.11 免疫荧光共聚焦显微镜观察
        2.12 酶联免疫吸附试验
        2.13 RNA分离和定量PCR
        2.14 统计学方法
    3 研究结果
        3.1 心肌梗死后Sirt3表达显著降低
        3.2 Sirt3过表达可减少梗死后心肌细胞死亡数量
        3.3 Sirt3过表达减轻梗死后心脏纤维化
        3.4 Sirt3过表达阻止梗死后心功能下降
        3.5 Sirt3过表达减轻梗死后心脏的炎症反应
    4 第一部分小结
第二部分 Sirt3对心肌梗死后线粒体结构和功能的调节作用
    1 研究背景
    2 材料与方法
        2.1 心肌梗死后心脏损伤模型建立、标本制作和分组
        2.2 线粒体活性氧测定
        2.3 线粒体膜电位检测
        2.4 蛋白质印迹分析
        2.5 免疫荧光共聚焦显微镜观察
        2.6 酶联免疫吸附试验
        2.7 统计学方法
    3 结果
        3.1 Sirt3抑制梗死后心脏线粒体分裂
        3.2 Sirt3通过抑制线粒体分裂来维持线粒体功能
        3.3 Sirt3通过抑制线粒体分裂阻止线粒体凋亡
    4 第二部分小结
第三部分 Sirt3抑制线粒体分裂调节机制
    1 研究背景
    2 材料与方法
        2.1 心肌梗死后心脏损伤模型建立、标本制作和分组
        2.2 细胞凋亡检测
        2.3 蛋白质印迹分析
        2.4 免疫荧光共聚焦显微镜观察
        2.5 统计学方法
    3 结果
        3.1 Sirt3通过正向调节AMPK表达抑制Drp1磷酸化
        3.2 Sirt3通过调节AMPK-Drp1通路抑制线粒体分裂
        3.3 Sirt3通过调节AMPK-Drp1通路抑制心肌细胞凋亡
    4 第三部分小结
讨论
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢



本文编号：3779629