亲环蛋白A通过AKT/Nox2信号通路调控在缺氧/复氧诱导下心肌细胞的凋亡

发布时间：2023-04-16 20:56

　　目的本实验主要在细胞水平上研究亲环蛋白A是否通过AKT/Nox2信号通路调控大鼠心肌细胞H9c2在缺氧/复氧条件下诱导的凋亡。方法在体外培养大鼠心肌细胞H9c2,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测β-actin、BAX、Bcl-2、Caspase-3、Nox1、Nox2、Nox4、AKT、p-AKT-Ser473的蛋白表达量;使用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)和TUNEL试剂盒检测H9c2细胞的凋亡率;通过二氢乙锭(Dihydroethidium,DHE)染色和电子自旋共振波谱仪(Electron Spin Resonance,ESR)测定H9c2细胞中活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)和依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶的O2-的含量。应用AKT抑制剂和NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,Nox2)抑制剂分别抑制AKT蛋白和Nox2蛋白的表达水平及其活性,并同时检测凋亡蛋白和抗凋亡...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
缩略词表
第一章 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 本研究的目的、内容
第二章 亲环蛋白A通过AKT/Nox2 信号通路调控心肌细胞在缺氧/复氧诱导下的凋亡
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂及耗材
        2.1.3 缓冲液及其他溶液
    2.2 方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 分组及细胞处理
        2.2.3 提细胞蛋白和 Western blot
        2.2.4 流式细胞术
        2.2.5 TUNEL
        2.2.6 DHE荧光探针
        2.2.7 电子自旋共振
        2.2.8 共聚焦显微镜
        2.2.9 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 细胞外的 CyPA 抑制了在缺氧/复氧条件下 H9c2 细胞的凋亡
        2.3.2 细胞外的 CyPA 降低了缺氧/复氧条件下 H9c2 细胞中 O2
-的产量
        2.3.3 AKT/Nox2 信号通路对CyPA在逆转缺氧/复氧诱导的细胞凋亡中的作用
        2.3.4 在缺氧/复氧的条件下，抑制 AKT/Nox2 信号通路部分地消除了CyPA介导的保护作用
        2.3.5 亲环蛋白A对缺氧/复氧条件下H9c2中Nox2 膜结合亚基的表达的影响
        2.3.6 机制示意图
    2.4 讨论
第三章 结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3791858

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