PSGL-1参与高盐引起的血管内皮损伤和靶器官损伤及miR-122通过TGFβ1/TGFβR1通路调控血管内皮EndMT

发布时间：2023-05-07 05:15

　　目的:探究PSGL-1通过炎症反应在小鼠盐敏感性高血压发生发展中的作用及分子机制。方法:体内实验:将PSGL-1基因敲除(PSGL-1-/-)小鼠及其野生型(PSGL-1+/+)小鼠,分别给予高盐(6%NaCl)和正常盐(0.4%NaCl)喂养三个月,麻醉状态下颈总动脉插管测量小鼠血压,利用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光、Elisa和免疫印迹方法检测小鼠组织中炎症反应、血管功能和肾脏损伤情况;体外实验一:分别提取PSGL-1+/+和PSGL-1-/-小鼠的外周血单个核细胞(PBMC),并用BCECF-AM探针染色。小鼠脑微血管内皮细胞单层分别给予130 mM和170 mM NaCl刺激三小时后,加入探针标记的PBMC细胞共孵育三十分钟,用倒置荧光显微镜拍照对比各组荧光强度,即代表PBMC粘附数量;体外实验二:提取小鼠外周血单个核细胞,分别在130 mM和170 mMNaCl浓度环境中与小鼠P-selectin重组蛋白共孵育,用流式细胞术检测与P-selectin重组蛋白结合的外周血单个核细胞的比例;体外实验三:将小鼠脑微血管内皮细胞(Bend.3)分别于130mMNaCl、170mM ...

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中英文缩略词
第一部分 PSGL-1参与高盐引起的血管内皮损伤和靶器官损伤
    摘要
    Abstract
    引言
    材料和方法
        1.实验材料
            1.1 实验细胞及实验动物
            1.2 主要实验仪器
            1.3 主要抗体及试剂
            1.4 主要试剂的配制
        2.实验方法
            2.1 颈动脉插管法检测小鼠动脉血压[45]
            2.2 血管功能检测
            2.3 免疫荧光法
            2.4 Elisa方法检测外周血血清中内皮素-1(ET-1)的表达量
            2.5 流式细胞术
            2.6 小鼠外周血单个核细胞(PBMC)—小鼠脑微血管内皮细胞(Bend.3)单层体外粘附作用
            2.7 免疫组化方法检测小鼠皮肤小血管和腹主动脉中炎症细胞浸润的检测
            2.8 免疫印迹法检测蛋白质表达水平
            2.9 细胞培养
        3.统计学分析
    实验结果
        1.PSGL-1参与高盐诱导的白细胞浸润
            1.1 PSGL-1参与高盐诱导的皮肤小血管炎症细胞的浸润
            1.2 PSGL-1参与高盐诱导的小鼠外周血单个核细胞(PBMC)-小鼠脑微血管内皮细胞(Bend.3)的体外粘附
            1.3 高盐促进白细胞表面的PSGL-1与P-selectin的结合
        2.PSGL-1对血管炎症和血管功能的影响
            2.1 PSGL-1参与高盐诱导的炎症细胞在主动脉中的浸润
            2.2 PSGL-1影响血管内皮eNOS的表达
            2.3 PSGL-1影响高盐诱导的内皮素-1的表达
            2.4 PSGL-1缺失抑制高盐饮食诱导的血管舒张功能的下降
        3.PSGL-1缺失抑制肾脏炎症反应和肾脏损伤
            3.1 PSGL-1参与高盐诱导的肾脏炎症细胞浸润
            3.2 PSGL-1参与高盐诱导的肾脏氧化应激和纤维化
        4.高盐通过NF-κB信号通路促进小鼠脑微血管内皮细胞表面的粘附分子表达
    讨论
    小结
第二部分 MiR-122通过TGFβ1/TGFβR1通路调控血管内皮EndMT的发生
    摘要
    Abstract
    引言
    材料与方法
        1.实验材料
            1.1 细胞与实验动物
            1.2 实验仪器
            1.3 实验试剂
        2.实验方法
            2.1 HE染色
            2.2 细胞培养
            2.3 细胞转染
            2.4 油红O染色
            2.5 RNA提取
            2.6 RT-PCR
            2.7 Real-time PCR
            2.8 免疫印迹法检测蛋白质表达水平
        3.统计学分析
    实验结果
        1.高脂饮食诱导的动脉粥样硬化小鼠中miR-122的表达
        2.血管内皮细胞发生EndMT过程中miR-122表达水平的变化
        3.MiR-122影响EndMT的发生
        4.MiR-122抑制H₂O₂诱导的EndMT
        5.MiR-122在不同种属中对TGFβ1/TGFβR1信号通路的调控差异性
    讨论
    小结
参考文献
文献综述
    参考文献
个人简历
致谢



本文编号：3810348