microRNA-34a-5p参与硫酸吲哚酚促动脉粥样硬化的作用机制研究

发布时间：2023-05-10 00:26

　　[目的]动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心脑血管疾病的主要病理基础,尿毒症毒素硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)是AS的重要危险因素,其发生机制仍未完全阐明。miR-34a-5p通路可多靶点作用于AS相关信号通路和分子。我们推测miR-34a-5p通路可能与IS促AS发生发展密切相关。为验证上述假设,我们拟采用分子生物学实验技术,对miR-34a-5p通路在IS促AS中的作用进行研究。[方法]1.运用MTT比色法检测IS对HUVECs、HA-VSMCs细胞活力的影响,筛选IS作用浓度和时间;2.IS干预HUVECs、HA-VSMCs,运用RT-qPCR检测细胞miR-34a-5p表达情况;3.先用miR-34a-5p抑制剂(inhibitors)和模拟物(mimics)质粒瞬时转染HUVECs、HA-VSMCs,以获得低表达和高表达miR-34a-5p的细胞,转染24小时后用IS处理细胞,IS浓度1000μM、干预36小时,运用CCK-8法和EdU法检测细胞增殖情况,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移情况,流式细胞术和Hoechst 33...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 国内外研究现状
        1.2.1 尿毒症毒素IS参与了致AS进程
        1.2.2 microRNA是促进AS发生发展的重要调控因素,其机制尚未阐明
        1.2.3 miR-34a通路与AS病理生理过程密切相关
    1.3 本课题的创新之处
第2章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 主要试剂与抗体
        2.1.3 主要仪器与耗材
    2.2 方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 硫酸吲哚酚溶液的配制
        2.2.3 MTT比色法
        2.2.4 细胞中总RNA提取
        2.2.5 miRNA cDNA第一链合成
        2.2.6 实时定量PCR(RT-qPCR)
        2.2.7 miRNA模拟物和抑制剂瞬时转染
        2.2.8 细胞增殖实验
        2.2.9 细胞迁移实验
        2.2.10 细胞凋亡实验
        2.2.11 贴壁细胞总蛋白提取
        2.2.12 BCA法蛋白定量
        2.2.13 Western blot
        2.2.14 统计学方法
第3章 结果
    3.1 IS对HUVECs、VSMCs细胞活力的影响
    3.2 IS干预HUVECs、VSMCs对miR-34a-5p表达的影响
    3.3 IS、miR-34a-5p对HUVECs和VSMCs增殖的影响
    3.4 IS、miR-34a-5p对HUVECs和VSMCs迁移的影响
    3.5 IS、miR-34a-5p对HUVECs和VSMCs凋亡的影响
    3.6 miR-34a-5p通路相关蛋白水平的表达情况
第4章 讨论
    4.1 AS是CKD的重要致死性因素
    4.2 IS促进AS发生发展
    4.3 miR-34a对AS的促进因素
    4.4 IS通过上调miR-34a发挥促AS的作用
    4.5 miR-34a在HUVECs和VSMCs中上调p53和下调Notch1表达可能是IS致AS的机制
第5章 结论
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间的科研成果
致谢



本文编号：3812676