miR-497-5p靶向沉默核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出

发布时间：2023-05-20 03:47

　　目的观察miR-497-5p对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)靶向调控及其对细胞胆固醇流出的影响。方法生物信息学与荧光素酶报告基因验证miR-497-5p与NLRP1靶向结合。人源THP-1单核细胞经佛波酯及氧化低密度脂蛋白处理后成为泡沫细胞。使用miR-497-5p mimic和miR-497-5p inhibitor处理细胞。实时荧光定量PCR和Western blot检测NLRP1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达情况。酶联免疫吸附法测定细胞培养液白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量。液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出水平。高效液相色谱法检测泡沫细胞内脂质含量。结果 miR-497-5p mimic能够显著性降低野生型NLRP1 3′UTR报告基因的荧光素酶活性。与对照组相比,miR-497-5p mimic组NLRP1、ASC、Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平明显下调,IL-1β和IL-18分泌明显减少。miR-497-5p mimic较对照组显著促进细胞胆固醇流出,减少细胞内总胆固醇、游离...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 试剂和仪器
    1.2 细胞培养
    1.3 荧光素酶报告基因检测
    1.4 实时荧光定量PCR
    1.5 Western blot检测
    1.6 ELISA测定细胞培养液IL-1β及IL-18含量
    1.7 液体闪烁计数法测定细胞胆固醇流出
    1.8 高效液相色谱分析
    1.9 统计分析
2 结 果
    2.1 miR-497-5p与NLRP1 3′UTR靶向结合
    2.2 miR-497-5p通过靶向调控NLRP1抑制炎症反应
    2.3 miR-497-5p促进胆固醇流出降低细胞脂质蓄积
3 讨 论



本文编号：3820478