受磷蛋白及钙-ATP酶的生成、转运，对正常及心肌梗死大鼠心肌细胞钙调控的影响

发布时间：2024-01-27 12:25

　　第一章成年SD大鼠原代心肌细胞分离培养,PLB及SERCA2a重组腺病毒载体的纯化及转染研究目的分离得到成年大鼠原代心肌细胞并成功培养,分离、纯化包含犬PLB和SERCA的腺病毒载体,并转染至分离成功的大鼠原代心肌细胞中;研究方法采用Lan’gendorff灌流法及Liberase酶解法分离得到成年SD大鼠原代心肌细胞,进一步分离纯化包含犬PLB和SERCA的腺病毒载体,并转染至培养的原代心肌细胞中,观察细胞存活时间及细胞状态,通过免疫组化法、western blot、calcium-imaging观察未转染细胞及转染成功后,心肌细胞PLB及SERCA分布、单个细胞功能等。研究结果1.成功分离出大鼠原代心肌细胞,分离存活率稳定在70-80%,并可稳定培养3-5天;2.包含犬PLB和SERCA2a的腺病毒载体经分离纯化,效价比较高,并可成功转染cos-1细胞,肉眼观测转染成功率达80%以上,western blot检测到新生蛋白成功表达,且含量随病毒浓度增加呈递增趋势;结论Lan’gendorff灌流法分离大鼠原代心肌细胞方法有效可行,成功率高,分离纯化重组腺病毒载体方法成熟且转染率高,...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
前言
    参考文献
第一部分 成年SD大鼠原代心肌细胞分离及培养,PLB及SERCA2a重组腺病毒载体的扩增、纯化及转染
    一、材料和方法
    二、结果
    三、讨论
    参考文献
第二部分 正常SD大鼠原代心肌细胞新生PLB及SERCA2a运输途径及其对心肌细胞自发钙活动、钙离子通道电流的影响
    一、材料和方法
    二、结果
    三、讨论
    参考文献
第三部分 心肌梗死SD大鼠原代心肌细胞PLB及SERCA2a的运输途径,及其对心肌细胞自发钙活动、钙离子通道电流的影响
    一、材料和方法
    二、结果
    三、讨论
    全文总结及局限性
    参考文献
综述
    参考文献
在读期间发表论文
致谢



本文编号：3886963