YAP通过增加HIF-1α转录活性进而促进小鼠下肢缺血后动脉生成

发布时间：2024-12-11 02:24

　　 目的:探讨内皮细胞Yes相关蛋白(YAP)在小鼠下肢缺血后动脉生成过程中的作用与机制。方法:缺氧处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),并使用Western blot检测YAP第127位丝氨酸的磷酸化水平,采用免疫荧光染色检测YAP的细胞亚定位情况;免疫共沉淀实验检测HUVECs中YAP与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)结合的情况;萤光素酶报告基因实验检测YAP野生型(YAP-WT)质粒以及YAP丝氨酸位点突变(YAP-5SA)质粒对HIF-1α转录活性的调节;构建内皮细胞特异性YAP过表达(EC-YAPtg)小鼠,于结扎股动脉手术后1、8、15和22 d使用激光多普勒血流仪检测小鼠下肢血流恢复情况;免疫荧光染色检测小鼠腓肠肌CD31、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及巨噬细胞分化抗原3(Mac3)的表达情况。结果:缺氧可以时间依赖性地下调YAP第127位丝氨酸的磷酸化,同时促进YAP在细胞核定位;免疫共沉淀实验证实,YAP可以与HIF-1α在缺氧条件下相互结合;YAP-WT或者YAP-5SA均可以显著增加HIF-1α的转录活性;与对照(YAPflox)小鼠相比,EC-YAPtg小鼠下肢...

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【部分图文】：

图1 缺氧降低YAP蛋白磷酸化水平并增加其核转位

EC-YAPtg小鼠的构建过程如图4A所示。对EC-YAPTg小鼠和对照小鼠（YAPflox）行股动脉结扎手术，分别于术后1、8、15和22d使用激光多普勒血流仪检测小鼠下肢血流恢复情况。与YAPflox小鼠相比，EC-YAPtg小鼠下肢的血流灌注显著增加（P<0.05），见图....

图2 YAP蛋白和HIF-1α蛋白相互结合

进一步提取EC-YAPtg小鼠和YAPflox小鼠腓肠肌并且进行免疫细胞化学染色检测CD31、α-SMA及Mac3表达水平。相比于YAPflox小鼠，EC-YAPtg小鼠肌肉中CD31和α-SMA表达明显增高（P<0.05），而Mac3表达没有明显变化（P>0.05），见图5。这....

图3 YAP增加HIF-1α的转录活性

图2YAP蛋白和HIF-1α蛋白相互结合讨论

图4 YAP过表达可以促进下肢缺血后血流恢复

血管生成，即从已有血管网中形成新的血管，常见于发育过程中[16]；动脉生成，是指现有的侧支血管的扩张，内皮细胞增殖后，平滑肌细胞有丝分裂，弹性层内破裂，血管平滑肌细胞迁移形成新内膜，一般见于出生后动脉网的延伸或缺血损伤后天然微血管侧支小动脉转变为功能动脉等过程[17]。动脉生成与....

本文编号：4016031