GDF-15microRNA干扰质粒和真核表达质粒对人脐静脉血管内皮细胞表达及增殖的影响

发布时间：2017-06-20 22:07

  本文关键词：GDF-15microRNA干扰质粒和真核表达质粒对人脐静脉血管内皮细胞表达及增殖的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:在体外观察人GDF-15基因siRNA干扰质粒和真核表达质粒对人脐静脉血管内皮细胞增殖及表达VEGF、bFGF的影响。方法:构建人GDF-15基因siRNA干扰质粒和GDF-15基因真核表达质粒,分别转染至HUVECs细胞中,实时荧光定量PCR检测GDF-15基因mRNA的表达水平,筛选出最佳的干扰序列。然后将细胞分为5组:空白对照组、干扰组、干扰对照组、真核表达组、真核表达对照组,用Western blot检测各组细胞GDF-15蛋白的表达情况,并运用ELISA法检测细胞上清液中VEGF、bFGF的含量,流式细胞仪检测细胞周期,了解细胞的增殖情况。结果:1、实时荧光定量PCR结果显示,HSH022853-24-CU6质粒组的mRNA的表达明显低于其它各组,抑制率约为92%,HSH022853-24-CU6为最佳干扰质粒。真核表达组mRNA的表达显著增高,达到其对照组的1000倍,且明显高于其它各组。2、Western blot检测目的蛋白,真核表达组的目的蛋白量最高,且明显高于其它四组,干扰组最低,且明显低于其阴性对照组和空白对照组;3、ELISA结果显示,空白对照组VEGF的表达显著高于其它四组,但真核表达组、干扰组与各自的阴性对照组相比表达量几乎相等,而各组的bFGF几乎测不出;4、流式细胞仪检测细胞周期,进入G2期和S期的细胞比率以真核表达组最高,明显高于空白对照组和干扰组,但是真核表达组、干扰组与各自相应的阴性对照组相比差别不大。结论:对于正常培养的HUVECs,GDF-15基因对血管内皮细胞产生VEGF、bFGF能力和对血管内皮细胞的增殖能力无影响。
【关键词】：干扰质粒 真核表达质粒 脐静脉血管内皮细胞 内皮细胞生长因子 增殖
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R541.4
【目录】：

• 摘要5-7
• abstract7-9
• 常用缩写词中英文对照表9-10
• 前言10-11
• 1 材料与方法11-26
• 1.1 材料11-16
• 1.2 方法16-26
• 2 结果26-34
• 2.1 倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察和检测质粒的转染效率26-27
• 2.2 实时荧光定量PCR检测转染后GDF-15基因mRNA的表达效果27
• 2.3 Western blot检测GDF-15蛋白含量27-28
• 2.4 ELISA检测细胞上清液中VEGF和bFGF的含量28-30
• 2.5 流式细胞仪检测细胞周期30-34
• 3 讨论34-36
• 4 结论36-37
• 参考文献37-39
• 综述39-47
• 参考文献44-47
• 致谢47-48
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果48-49
• 个人简历49

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1 张亚如;GDF-15microRNA干扰质粒和真核表达质粒对人脐静脉血管内皮细胞表达及增殖的影响[D];山西医科大学;2016年

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本文编号：466997