异甘草素对自发性高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用

发布时间：2017-08-24 17:08

  本文关键词：异甘草素对自发性高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用

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【摘要】：目的:研究异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertension rats,SHR)脑基底动脉血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)大电导钙激活钾通道(Large conductance Ca-activated K 2++channel,BKCa)的调节作用。方法:在使用异甘草素干预处理前后,用尾动脉测压仪观察SHR血压变化;依次用10-5mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE)、10-5 mol/L苯肾上腺素和10-4 mol/L异甘草素、10-5mol/L苯肾上腺素分别对SHR脑基底动脉灌流后,脑基底动脉的直径应用压力型小动脉仪进行测量;用全细胞膜片钳技术研究SHR脑基底动脉平滑肌细胞(VSMC)BKCa通道电流的变化;用ELISA技术观察SHR脑基底动脉内c GMP水平变化。结果:(1)ISL干预前SHR血压是(218.3±1.6)mm Hg,与WKY血压(119±2.1)mm Hg相比,两者具有显著统计学差异(p0.01,n=6)。与ISL干预前相比,ISL灌胃(12mg/kg.d)14天后SHR血压降至(119.2±1.9)mm Hg(p0.01,n=6),但与WKY血压没有明显差异;(2)含有PE(10-5 mol/L)的PSS液体在压力型小动脉测量仪水浴槽内持续对血管段进行灌流,待血管段收缩状态稳定后,再用含有ISL(10-4 mol/L)和PE(10-5 mol/L)的PSS液体持续灌流冲洗,血管舒张达到稳定状态后,给予含PE(10-5 mol/L)的PSS液体再次持续灌流冲洗,记录血管直径分别为:(235.6±26)μm、(309.2±25)μm和(241.1±27)μm,提示ISL舒张SHR脑基底动脉(n=6,p0.01);(3)单个脑基底动脉平滑肌细胞钳制电压在-40 m V,外向电流在刺激电压-40~-20 m V区间内无显著变化,10-4 mol/L ISL在0-60 m V区间内可以呈电压依赖性增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流(n=6,p0.05);(4)在0、10-7、10-6、10-5、10-4和3×10-4 mol/L异甘草素作用下,平滑肌细胞+60m V时的外向电流分别是(144±25)p A、(156±24)p A、(173±24)p A、(211±21)p A、(252±21)p A和(262±20)p A。除10-7 mol/L异甘草素组和对照组没有明显差异外,其余各组均呈浓度依赖性增强外向电流,提示ISL呈浓度依赖性增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流(n=6,p0.05),且增强平滑肌细胞外向电流的EC50为9.5μmol/L;(5)异甘草素干预后的SHR平滑肌细胞外向电流(+60m V)从(212.1±32)p A增加到(283.2±28)p A(p0.01,n=6),用10-3 mol/L四乙胺(TEA,BKCa通道阻断剂)灌流3min后,SHR平滑肌细胞在+60m V时的外向电流减小到(143.4±21)p A(p0.05,n=6)。该结果提示异甘草素增强的平滑肌细胞外向电流由BKCa通道介导;(6)预灌流10-5 mol/L亚甲蓝(MB,可溶性鸟苷酸环化酶阻断剂)3min后,异甘草素增强的平滑肌细胞外向电流(+60m V)从(324.3±74)p A减小到(171.9±42)p A(p0.05,n=6),与对照组(163.9±43)p A相比没有统计学差异。该结果提示异甘草素增强的外向电流主要由可溶性鸟苷酸环化酶(Soluble Guanylyl Cyclase,s GC)介导;(7)在正常电极内液下,给予10-4 mol/L ISL预灌流3 min后,脑基底动脉VSMC的外向电流(+60m V)由(191.1±31)p A增加至(381±35)p A(n=6,p0.01)。在电极内液中加入20μmol/L BAPTA-AM(选择性钙离子螯合剂),再给予10-4 mol/L ISL预灌流3 min后,脑基底动脉VSMC的外向电流(+60m V)由(76.7±18)p A增加至(151.4±19)p A(n=6,p0.01)。该结果提示BAPTA-AM可以明显抑制各组平滑肌细胞的生理外向电流,但对异甘草素增强脑基底动脉VSMC外向电流的比率无显著影响;(8)异甘草素干预14d后,SHR脑基底动脉内c GMP水平由(31.4±3.8)pmol/mg protein增加至(78.7±12.7)pmol/mg protein(p0.05,n=6),与WKY(66.0±7.4)pmol/mg protein相比没有统计学差异。该结果提示异甘草素可明显增加SHR脑基底动脉内c GMP含量。结论:异甘草素可能通过增加SHR脑基底动脉内c GMP含量,增强平滑肌细胞BKCa电流,血管平滑肌细胞发生超极化,舒张脑基底动脉,使SHR血压降低。
【关键词】：脑基底动脉 异甘草素 平滑肌细胞 大电导钙激活钾通道 环磷酸鸟苷 膜片钳 ELISA
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R544.1
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 缩略词表11-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-22
• 1 材料14-16
• 1.1 实验动物14
• 1.2 主要实验仪器14-15
• 1.3 主要实验试剂、耗材15-16
• 2 方法16-21
• 2.1 大鼠尾动脉血压测定16
• 2.2 溶液及主要实验药品的配制16-17
• 2.3 标本制备17-18
• 2.4 异甘草素对SHR模型的干预18-19
• 2.5 玻璃微电极的制备19
• 2.6 全细胞膜片钳记录方法19
• 2.7 压力型小动脉测量仪技术19
• 2.8 ELISA技术19-21
• 3 统计学处理21-22
• 结果22-31
• 1. 异甘草素降低SHR血压22
• 2. 异甘草素舒张SHR脑基底动脉22-23
• 3. 异甘草素增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流具有电压依赖性23-25
• 4. 异甘草素增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流具有浓度依赖性25-26
• 5 异甘草素增强的脑基底动脉VSMC外向电流可能由BKCa通道介导26-27
• 6. 异甘草素增强脑基底动脉VSMC外向电流由sGC介导27-28
• 7. BAPTA-AM抑制各组平滑肌细胞的生理外向电流，，但对异甘草素诱导增强的外向电流比率无显著影响28-30
• 8. 异甘草素增加脑基底动脉血管内cGMP含量30-31
• 讨论31-35
• 结论35-36
• 展望36-37
• 参考文献37-41
• 文献综述41-49
• 参考文献46-49
• 致谢49-50
• 作者简历50-51
• 导师评阅表51

【参考文献】

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本文编号：732492