他汀类药物预处理对小鼠心肌缺血再灌注的影响及不同用药模式下的抗炎效果

发布时间：2017-08-30 18:28

  本文关键词：他汀类药物预处理对小鼠心肌缺血再灌注的影响及不同用药模式下的抗炎效果

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【摘要】：目的:冠心病(coronary atherosclerotic heart disease,CHD)已经成为影响人类生命质量和健康水平的最重要疾病之一。近30年来,介入技术的突破性进展和普及应用,使得冠心病的治疗方式和疗效极大改善。但伴随溶栓治疗、支架置入、冠状动脉旁路移植术等方式重新恢复梗塞冠脉血供,心肌缺血/再灌注(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)损伤的发生却使得血运重建的患者不仅未从相关血管再开通中受益,反而加重了心脏血流动力学障碍和心肌损伤,甚至最终导致死亡。作为目前临床中常用的动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)和急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)治疗药物,他汀类药物(statins)除了本身的调脂作用,还具有稳定动脉硬化斑块,改善血管内皮功能,免疫调节等多重药理效应。基于此种多重药理效应,他汀类药物在心血管疾病中的应用值得进一步探索。本研究拟选取新一代他汀类药物中具有代表性的瑞舒伐他汀(Rosuvastatin),并在小鼠MI/R模型中多节点、多时段、多步骤,分析其与MI/R损伤炎症因子、炎症反应和心肌细胞凋亡之间的关系,探讨他汀类药物对MI/R损伤的保护作用和潜在机制,分析他汀类药物抗心肌细胞凋亡的潜在机制。本研究还拟通过比较不同用药模式下瑞舒伐他汀的抗炎作用和疗效,观测他汀类药物的剂量、负荷量、及频次变化,对MI/R损伤炎症因子和炎症反应的影响,探讨他汀类药物在保护MI/R损伤时科学、合理的用药方式,为冠心病患者的临床治疗策略提供更有意义的依据。方法:1.将120只C57 BL/6小鼠随机分为3组,即正常对照组(Sham组)、缺血/再灌注组(MI/R组)、缺血/再灌注+瑞舒伐他汀预处理组(MI/R+R组),每组40只。MI/R+R组于术前第7天开始,每日空腹给予瑞舒伐他汀5 mg/kg灌胃一次,连续7天。Sham组和MI/R组则给予生理盐水灌胃,剂量与方法同MI/R+R组。将3组小鼠于MI/R后1 h,分别随机选取8只,进行血浆肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)含量检测,分析炎症因子水平。将3组小鼠随机选取16只,于MI/R后3 h分别进行脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法染色(TdT-mediateddutpnick-endlabeling,tunel)和caspase-3活性检测,检测心肌细胞凋亡情况。将3组小鼠于mi/r后24h,分别随机选取8只,进行伊文式蓝/2,3,5—氯化三苯基四氮唑(evansblue/2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride,evansblue/ttc)双染色,明确小鼠的左心室(leftventricular,lv)面积,缺血心肌面积(areaatrisk,aar)和心肌梗死面积(inf-arctareal,inf),并计算小鼠的总缺血面积(aar/lv×100%)和心肌梗死面积(inf/aar×100%)2.将60只c57bl/6小鼠随机分为5组,即假手术组(sham组)、缺血/再灌注组(mi/r组)、缺血/再灌注+正常剂量组(mi/r+r组)、缺血/再灌注+术前负荷剂量组(mi/r+sl)、缺血/再灌注+连续负荷剂量组(mi/r+ml)。mi/r+r组于术前第7天开始,每日空腹给予瑞舒伐他汀5mg/kg灌胃一次,连续7天;mi/r+sl组于术前8h,空腹一次性给予瑞舒伐他汀灌胃20mg/kg;mi/r+ml组于术前第7天开始,每日空腹给予瑞舒伐他汀20mg/kg灌胃一次,连续7天;sham组和mi/r组给予生理盐水灌胃,剂量与方法同mi/r+r组。各小鼠于在mi/r发生后,1h、3h、8h、24h及3d、7d分别检测血浆tnf-α与hs-crp含量。结果:1.在小鼠mi/r后1h,mi/r+r组和mi/r组的血浆hs-crp和tnf-α含量均高于sham组(p均0.05),但经瑞舒伐他汀预处理后,mi/r+r组的血浆hs-crp(0.64±0.23mg/lvs.1.51±0.24mg/l,p0.05)和tnf-α(137.40±3.64pg/mlvs.161.55±8.05pg/ml,p0.05)水平明显低于mi/r组。2.在小鼠mi/r后3h,mi/r+r组和mi/r组的tunel染色阳性率和caspase-3活性高于sham组(p均0.05),但mi/r+r组的tunel染色阳性率和caspase-3活性低于mi/r组(p均0.05)。3.在小鼠mi/r后24h,mi/r+r组和mi/r组的总缺血面积(aar/lv×100%)均明显高于sham组(p均0.05),mi/r+r组和mi/r组之间的总缺血面积无明显统计学差异。但mi/r+r组的心肌梗死面积(inf/aar×100%)明显低于mi/r组(p0.05)。4.在小鼠mi/r后1h、3h、8h、24h,相较mi/r组而言,mi/r+r组、mi/r+sl组和mi/r+ml组的血浆hs-crp和tnf-α水平均显著降低(p均0.05)。而mi/r后1h、3h、8h,mi/r+sl组和mi/r+ml组的hs-crp和tnf-α水平均显著低于mi/r+r组(p均0.05)。mi/r后24h,mi/r+r组、mi/r+sl组和MI/R+ML组之间hs-CRP和TNF-α水平已无统计学差异。MI/R后3d,仅MI/R组和MI/R+R组仍高于Sham组(P均0.05),MI/R+SL组和MI/R+ML组已与Sham组已无统计学差异,而MI/R+SL组和MI/R+ML组的hs-CRP和TNF-α水平仍明显低于MI/R组(P均0.05)。MI/R后7d,各组小鼠的hs-CRP和TNF-α水平均未发现有统计学差异。5.在整体动态检测过程中(1 h、3 h、8 h、24 h及3d、7d),MI/R+SL组和MI/R+ML组之间的血浆hs-CRP和TNF-α含量始终无统计学差异。结论:1.瑞舒伐他汀预处理可显著降低小鼠MI/R损伤炎症因子hs-CRP和TNF-α的水平,发挥抗炎特性,抑制MI/R损伤中的炎症反应。在经历相同程度的心肌缺血状态下,瑞舒伐他汀预处理的小鼠心肌梗死面积更小,心肌细胞凋亡受到明显抑制。他汀类药物减轻MI/R损伤的机制可能涉及其抗炎功效和抗凋亡作用,而MI/R损伤中的炎症反应与心肌细胞凋亡紧密相关。他汀类药物很可能通过抑制MI/R后的炎症因子和炎症反应,进而减轻心肌细胞凋亡的发生。2.他汀类药物预处理的干预方式均可有效降低小鼠MI/R损伤过程中的炎症因子和炎症反应。在MI/R损伤动态监测过程中,相较常规给药剂量而言,他汀类药物的负荷剂量给药方式可更为显著的降低MI/R损伤早期炎症因子hs-CRP和TNF-α的水平,抑制MI/R损伤炎症因子和炎症反应。而他汀类药物的负荷剂量给药方式也可以更早减轻MI/R损伤的炎症反应。在小鼠MI/R模型中,通过在整个炎症进程中对比他汀类药物的术前单次负荷剂量和连续负荷剂量,结果提示两种用药方式的抗炎作用并无明显差异。他汀类药物连续负荷剂量的用药方式并未呈现出更好的抗MI/R损伤炎症的作用。基于他汀类药物应用的经济性、简便性和安全性,MI/R损伤中的术前单次负荷剂量使用他汀类药物,将更有利于临床治疗策略的制定。
【关键词】：心肌缺血再灌注 他汀类药物 炎症因子 细胞凋亡 负荷剂量
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.2
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 缩略语13-16
• 前言16-23
• 研究现状、成果16-19
• 研究目的、方法19-23
• 一、他汀类药物预处理对小鼠心肌缺血再灌注的影响及机制23-43
• 1.1 对象和方法23-32
• 1.1.1 实验动物23
• 1.1.2 主要仪器23
• 1.1.3 主要试剂23-24
• 1.1.4 实验分组24
• 1.1.5 小鼠在体MI/R模型构建24-25
• 1.1.6 小鼠心肌Evansblue/TTC双染色及心肌梗死面积评估25-26
• 1.1.7 小鼠心肌TUNEL染色26-28
• 1.1.8 小鼠心肌Caspase-3 活性检测28-29
• 1.1.9 小鼠血浆hs-CRP和TNF-α 检测和统计学方法29-32
• 1.2 结果32-37
• 1.2.1 小鼠在体MI/R模型评估32-33
• 1.2.2 瑞舒伐他汀预处理降低小鼠MI/R血浆hs-CRP和TNF-α33
• 1.2.3 瑞舒伐他汀预处理降低小鼠MI/R心肌梗死面积33-35
• 1.2.4 瑞舒伐他汀预处理降低小鼠MI/R TUNEL阳性率35-37
• 1.2.5 瑞舒伐他汀预处理降低小鼠MI/R Caspase-3 活性37
• 1.3.讨论37-41
• 1.3.1 心肌缺血再灌注模型的构建和评估37-39
• 1.3.2 心肌缺血再灌注中的炎症反应和细胞凋亡39-40
• 1.3.3 他汀类药物的抗炎作用和抗凋亡作用40-41
• 1.4 小结41-43
• 二、不同用药模式的他汀类药物对心肌缺血再灌注损伤的抗炎作用43-54
• 2.1 对象和方法43-48
• 2.1.1 实验动物43
• 2.1.2 主要仪器43
• 2.1.3 主要试剂43-44
• 2.1.4 实验分组44
• 2.1.5 不同分组小鼠的用药模式44
• 2.1.6 小鼠在体MI/R模型构建44-45
• 2.1.7 动态检测小鼠血浆hs-CRP和TNF-α含量45-47
• 2.1.8 统计学分析及处理47-48
• 2.2 结果48-51
• 2.2.1 小鼠在体MI/R模型评估48
• 2.2.2 MI/R 1 h各组小鼠血浆hs-CRP和TNF-α 比较48
• 2.2.3 MI/R 3 h各组小鼠血浆hs-CRP和TNF-α 比较48-49
• 2.2.4 MI/R 8 h各组小鼠血浆hs-CRP和TNF-α 比较49-50
• 2.2.5 MI/R 24 h各组小鼠血浆hs-CRP和TNF-α 比较50
• 2.2.6 MI/R 3 d各组小鼠血浆hs-CRP和TNF-α 比较50-51
• 2.2.7 MI/R 7 d各组小鼠血浆hs-CRP和TNF-α 比较51
• 2.3.讨论51-53
• 2.3.1 不同剂量他汀类药物对MI/R损伤的影响51-52
• 2.3.2 不同频次他汀类药物对MI/R损伤的影响52-53
• 2.4.小结53-54
• 局限性和研究展望54-55
• 结论55-56
• 参考文献56-67
• 发表论文和参加科研情况说明67-68
• 综述 心肌缺血再灌注损伤的研究进展68-85
• 综述参考文献77-85
• 致谢85

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本文编号：760901