束缚应激大鼠心脏交感神经去甲肾上腺素转运蛋白与β肾上腺素受体内化

发布时间：2017-09-15 10:09

  本文关键词：束缚应激大鼠心脏交感神经去甲肾上腺素转运蛋白与β肾上腺素受体内化

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【摘要】：目的:应激性心肌病(stress cardiomyopathy,SC)是由于机体对环境或精神刺激的强烈应激性反应所诱发的急性严重心血管不良事件,近年来受到关注。该病以心脏形态呈心尖部球性变(ballooning)为特征,可出现急性左心功能不全和心肌损伤标志物水平升高等类似急性冠脉综合征的临床表现。其发病机制尚不完全清楚,目前认为,其发病机制主要是交感神经活性异常、儿茶酚胺大量释放导致急性心肌损伤,其次是冠脉痉挛、微血管功能异常等。交感神经对心功能的调控作用是通过激活心肌细胞上的β肾上腺素受体(βadrenergic receptor,β-AR)实现的,β-AR受体激活程度对心功能有重要影响[1,2],去甲肾上腺素转运蛋白(norepinephrine transporter,NET)位于神经突触末梢,对调控突触间隙中去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)浓度和终止神经冲动信号具有重要作用。研究观察到,应激后交感神经激活导致心肌β-AR不同亚型表达发生不同的变化[2,3],心脏交感神经再摄取功能也出现异常[4],但再摄取功能与β-AR受体表达变化的具体机制和相关关系,目前还不完全清楚。因此,本实验建立大鼠束缚(Immobilization,IMO)应激性心肌病模型,通过观察IMO前后NET与心肌β-AR亚型表达的变化,探讨心脏交感神经系统变化在SC发生中的作用。方法:1选取SD大鼠26只,采用急性束缚应激建立应激性心肌病模型(束缚组13只),设未处理者为对照组(13只)。2采用Powerlab生理记录仪监测大鼠心电图和血流动力学指标的变化,超声心动图观察心脏形态变化。3采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测两组颈交感神经节中NET,心脏中β1-AR和β2-AR的m RNA表达。4采用western blot分别检测两组大鼠心脏NET,β1-AR和β2-AR蛋白表达的差异。5取左心室心肌组织切片,苏木素—伊红染色(haematoxylin-eosin staining,HE stain)后镜下观察两组大鼠心肌细胞的形态。6采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immnosorbent assay,ELISA)检测束缚30min和2h大鼠血浆NE和肌钙蛋白I(troponin I,cTnI)浓度。结果:1一般情况及超声心动图与对照组相比,实验组大鼠体重、左室重量和心脏重量均无显著差异(P0.05)。实验组大鼠超声1只可见较明显球形形变,其余形态变化不明显。2心电图监测与对照组相比,束缚固定后即可看到两组大鼠心电图的差异。实验组RR间期缩短(P0.01),心率增快(P0.01),Q波幅度加深(P0.01),R波幅度升高(P0.01),QTc间期延长(P0.01),ST段高度升高(P0.05)。3血流动力学监测与对照组相比,实验组左心室压力峰值压(Max Pressure)明显升高(P0.01),平均压(Mean Pressure)升高(P0.05),左心室内压最大上升、下降速率(±d P/dt)均增快(P0.01,P0.05)。4 RT-PCR实验与对照组比较,束缚组大鼠颈交感神经节中NET m RNA表达增加(6.81倍),心脏中β1-AR m RNA表达减少(0.39倍),β2-AR m RNA表达增加(8.54倍)。5 Western blot实验与对照组相比,束缚实验组大鼠心脏交感神经表达NET总蛋白(P0.05)和胞浆蛋白(P0.05)无明显差异,在细胞膜蛋白中含量下降(P0.05);束缚实验组大鼠心脏β1-AR总蛋白(P0.05)和细胞膜中(P0.05)含量下降,而在胞浆蛋白的表达与对照组无明显差异(P0.05)。束缚实验组大鼠心脏β2-AR总蛋白(P0.05)和在细胞膜中(P0.05)含量增加,而在胞浆蛋白的表达与对照组无明显差异(P0.05)。6 HE染色实验结果发现,束缚组大鼠心脏出现炎性细胞聚集,心肌细胞水肿,坏死等心肌毒性表现。7 ELISA实验与对照组相比,束缚30min实验组血浆NE和cTnI水平均明显升高(P0.05);2h血浆NE和cTnI水平仍明显升高(P0.05)。并且,实验组血浆cTnI在2h时的水平明显高于30min时(P0.05)。结论:1成功束缚应激大鼠建立应激性心肌病模型。2束缚应激可导致大鼠血浆NE和cTnI浓度升高,cTnI浓度束缚2h浓度明显高于束缚30min水平,并且心肌组织出现炎性细胞浸润,心肌细胞水肿,坏死等表现。3应激性心肌病大鼠心脏NET蛋白含量在细胞膜中下降,而总含量和在细胞浆中无明显变化,提示NET出现定位变化即内化,此种变化可导致NE再摄取功能异常。同时,实验组大鼠神经节NET m RNA升高,可认为是对其定位变化的代偿性反应。4应激性心肌病大鼠心脏通过下调β1-AR蛋白在细胞膜中的表达减少心脏毒性,通过上调β2-AR蛋白在细胞膜中的表达增强保护作用。
【关键词】：应激性心肌病 大鼠 束缚应激 去甲肾上腺素 去甲肾上腺素转运蛋白 心功能 β肾上腺能受体
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.2
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-25
• 结果25-27
• 附图27-34
• 附表34-36
• 讨论36-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 综述 应激与心血管疾病44-53
• 参考文献50-53
• 致谢53-54
• 个人简历54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李贺;周欣;彭朋;何冰;王得顺;胡冰;郑淑芳;;神经递质转运蛋白在应激性心肌病发病中的潜在作用[J];生命科学;2012年06期

2 ;Cardiac sympathetic nerve terminal function in congestive heart failure[J];Acta Pharmacologica Sinica;2007年07期

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本文编号：855895