AMPK在视网膜色素上皮细胞凋亡中的作用及机制研究

  本文关键词：神经酰胺—内质网应激-AMPK在视网膜色素上皮细胞凋亡中的作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

《南京医科大学》 2014年

神经酰胺—内质网应激-AMPK在视网膜色素上皮细胞凋亡中的作用及机制研究

毕会娥  

【摘要】：目的：研究神经酰胺、内质网应激、AMPK信号通路在氧化应激诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡中的调控作用及其相互作用机制。 方法： (1)以RPE细胞作为研究对象,采用H2O2(200μM)/UV处理体外模拟RPE细胞氧化损伤的凋亡模型；采用Western blot检测细胞内AMPK信号通路, TUNEL法检测细胞凋亡；采用AMPK激动剂AICAR(1mM)和抑制剂Compound C(CC)(10μM)干预RPE细胞功能,TUNEL法检测细胞凋亡的变化,探讨AMPK信号在氧化应激诱导的RPE细胞凋亡中的作用； (2)建立RPE细胞的氧化应激模型,Western blot法检测内质网应激的变化；通过药物Salubrinal (Sal)(10μM)处理干预内质网应激活性,评价内质网应激在氧化应激诱导的RPE细胞凋亡中的作用； (3)建立RPE细胞的氧化应激模型,用放射自显影法检测细胞内神经酰胺含量变化；添加神经酰胺类似物C6(μg/mL)神经酰胺酶从头合成酶抑制剂fumonisinB1(FB-1)(10μM)预处理,TUNEL法检测细胞凋亡的变化情况,明确神经酰胺在氧化应激诱导的RPE细胞凋亡中的作用； (4)H2O2处理RPE细胞前添加内质网应激抑制剂Sal预处理,Western blot检测AMPK活化情况；添加神经酰胺类似物C6预处理, Western blot检测内质网应激以及AMPK活化情况,研究三者在凋亡调控中的上下游关系。 结果： (1)经H2O2/UV处理后的RPE细胞内AMPK和内质网应激均被激活；细胞内神经酰胺含量增多。分别添加AMPK、内质网应激及神经酰胺合成酶抑制剂预处理后的细胞凋亡受到抑制。分别添加AMPK激活剂及神经酰胺类似物后凋亡水平提高。 (2)在H2O2/UV诱导的细胞凋亡模型中,添加神经酰胺类似物可以促进内质网应激和AMPK的活化；添加内质网应激抑制剂后可抑制AMPK的活化。 结论：UV/H2O2促进神经酰胺生成后通过内质网应激途径激活AMPK信号通路,以促进视网膜色素上皮细胞凋亡。

【关键词】：
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R774.5
【目录】：

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