Pax6对大鼠脂肪间充质干细胞的分化诱导作用及其应用研究

发布时间：2016-11-12 12:12

  本文关键词：Pax6对大鼠脂肪间充质干细胞的分化诱导作用及其应用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《成都医学院》 2015年

Pax6对大鼠脂肪间充质干细胞的分化诱导作用及其应用研究

罗永慧  

【摘要】：目的脂肪间充质干细胞是多能成体干细胞,具有多向分化的潜能。本实验用Pax6-EGFP质粒转染脂肪间充质干细胞诱导其向角膜上皮样细胞分化,以期为组织工程角膜提供有效的角膜上皮细胞来源,用于治疗角膜损伤。方法使用酶消化-组织块培养的方法从SD(Sprague Dawley,SD)大鼠腹股沟皮下脂肪中提取培养脂肪间充质干细胞,并对提取培养的细胞进行鉴定。实验分为转染质粒Pax6-EGFP组及对照组。转化扩增Pax6-EGFP质粒,用此质粒通过脂质体转染的方法转染脂肪间充质干细胞,然后通过G418抗性筛选出成功转染的干细胞,筛选出的细胞继续培养并对转染效果进行鉴定。同时利用细胞克隆形成实验对两组细胞的活力及增殖速度进行比较。然后将细胞移植到角膜全层切除的新西兰大白兔眼角膜上,并对其移植治疗效果进行观察。结果从SD大鼠腹股沟皮下脂肪处提取得来的细胞,该细胞呈长梭形形状并向心性排列生长,且细胞CD90、CD105呈现阳性表达,而CD34、CD45表达呈阴性。Pax6-EGFP质粒转染脂肪间充质干细胞后,细胞表达绿色荧光蛋白能被激发出绿色荧光。G418抗性筛选所得Pax6-EGFP质粒转染阳性的细胞,形状呈铺路石样。细胞克隆形成实验结果表明,未转染质粒的细胞增殖活力较转染质粒细胞好,且增殖速度也更快。免疫荧光及western blot结果均表明,质粒成功转染后的细胞带有绿色荧光,同时这些细胞还表达CK3-12、E-cadherin及Pax6-EGFP蛋白。将转染Pax6-EGFP质粒的干细胞移植到角膜全层切除及角膜缘深层破坏的新西兰大白兔的角膜上,术后观察到角膜表面光滑透亮无浑浊,且通过HE染色及倒置显微镜显示新西兰大白兔角膜表皮出现铺路石样细胞,并且该细胞带有绿色荧光。结论经过Pax6基因转染可成功将脂肪间充质干细胞诱导为角膜上皮样细胞,并且此细胞可成功转移至损伤的兔角膜上皮,有望作为一种移植细胞来源,治疗损伤角膜。

【关键词】：
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R779.65
【目录】：

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