H_2O_2诱导的视网膜色素上皮细胞的凋亡过程中AChE的表达

发布时间：2017-03-17 18:01

  本文关键词：H_2O_2诱导的视网膜色素上皮细胞的凋亡过程中AChE的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨氧化应激诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡过程中乙酰胆碱酯酶（AChE）的变化及其可能发挥作用的分子机制。 方法：培养人RPE细胞株ARPE-19，分为H2O2氧化组、H2O2未处理组（对照组）和氧化保护组（加入EGCG）。MTT法观察不同浓度H2O2对ARPE-19细胞活性的影响；免疫荧光检测正常视网膜AChE的表达；分别采用TUNEL染色和Western印迹法检测高浓度H2O2作用2小时后AChE和PARP-1的表达变化。采用t检验统计分析不同浓度H2O2作用不同时间的结果。 结果： H2O2＞500μmol/L时，处理2h后AChE的表达开始升高，选择1000μmol/L为后续实验浓度。H2O2作用RPE细胞2h后，MTT显示细胞活性随着H2O2浓度升高而下降，Western印迹法检测到AChE和PARP的表达量明显上升。免疫荧光AChE染色阳性。此外，加入EGCG后，细胞活力从31.20％±3.90％升高到70.23％±12.96％。 结论：H2O2可以导致RPE细胞凋亡，RPE细胞凋亡过程中AChE的表达升高。
【关键词】：视网膜色素上皮细胞 细胞凋亡 过氧化氢 乙酰胆碱酯酶
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R77
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 中英文缩略词表7-9
• 第1章 引言9-12
• 第2章 材料与方法12-20
• 2.1 实验材料12-13
• 2.1.1 试剂／试剂盒来源12
• 2.1.2 主要仪器及应用软件12-13
• 2.2 主要试剂的配制13-14
• 2.3 实验方法14-19
• 2.3.1 人 RPE 细胞氧化损伤模型的建立14-15
• 2.3.2 实验分组15
• 2.3.3 MTT 法检测细胞活力15-16
• 2.3.4 细胞免疫荧光染色16
• 2.3.5 免疫荧光和 TUNEL 双重染色16-17
• 2.3.6 Western Blotting 法检测凋亡过程中 AChE 蛋白表达的变化17-19
• 2.4 图像分析19
• 2.5 统计学处理19-20
• 第3章 结果20-23
• 3.1 RPE 细胞的形态20
• 3.2 氧化应激条件下培养的细胞系 ARPE-19 细胞生物学特征20-21
• 3.3 氧化应激条件下培养的 ARPE-19 细胞 AChE 表达量的变化21-23
• 第4章 讨论23-27
• 4.1 氧化应激和 RPE 细胞凋亡的联系23
• 4.2 RPE 细胞凋亡的途径23-24
• 4.3 AChE 在细胞凋亡过程中的可能机制24-25
• 4.4 RPE 细胞损伤治疗的新方向25-27
• 第5章 结论与展望27-28
• 5.1 结论27
• 5.2 进一步工作的方向27-28
• 致谢28-30
• 参考文献30-37
• 攻读学位期间的研究成果37-38
• 综述38-43
• 参考文献41-43

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Calcium Overload Is A Critical Step in Programmed Necrosis of ARPE-19 Cells Induced by High-Concentration H_2O_2[J];Biomedical and Environmental Sciences;2010年05期

  本文关键词：H_2O_2诱导的视网膜色素上皮细胞的凋亡过程中AChE的表达，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：253220