硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛介导的视网膜色素上皮损伤的研究

发布时间：2017-03-19 03:09

  本文关键词：硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛介导的视网膜色素上皮损伤的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 探究新型合成药物硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛诱导人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）损伤的保护作用和丙烯醛介导大鼠视网膜-脉络膜组织的损伤作用。 方法： 1、HE染色法检测ARPE-19细胞形态改变；MTT比色法检测细胞活性并测其生长曲线。 2、通过MTT比色法、HE染色法检测丙烯醛介导ARPE-19细胞损伤模型的建立：将0μmol/L；25μmol/L；50μmol/L；100μmol/L和200μmol/L丙烯醛分别加入对数生长期的ARPE-19细胞中处理24小时，建立视网膜色素上皮细胞损伤模型并确定其最佳损伤浓度。 3、通过细胞流式和WesternBlot等方法检测丙烯醛介导的ARPE-19细胞凋亡及硫辛酸烟酸二联体的保护作用。预先将0μmol/L；100μmol/L；150μmol/L硫辛酸烟酸二联体和100μmol/L硫辛酸分别加入对数生长期的ARPE-19细胞中处理24小时，再加入经确定的丙烯醛损伤模型浓度处理24小时，细胞流式方法检测细胞凋亡情况，WesternBlot法检测凋亡蛋白Bax/Bcl-2比率的改变。 4、HE染色法观察丙烯醛对大鼠视网膜-脉络膜组织的损伤作用：随机数字表将12只SD大鼠分为三组，即空白对照组、丙烯醛药物处理4周组和丙烯醛药物处理8周组。按2.5mg/kg/day的量将丙烯醛溶于200μl新鲜自来水中，在配药2h内给SD大鼠灌胃，作为丙烯醛药物处理组；空白组给予等量的新鲜自来水。待动物给药4周和8周后，分别处死SD大鼠，并取SD大鼠眼球组织，，行常规HE病理组织切片染色。 5、统计学分析：实验数据均以均数±标准差（μ±s）表示，运用SPSS13.0统计计算软件进行方差分析，P＜0.05有统计学意义，P＞0.05无统计学意义。 结果： 1、ARPE-19细胞的体外生长情况：ARPE-19细胞24小时内贴壁生长，第1到第6天内生长分裂迅速进入对数生长期，6天后细胞数开始减少。 2、丙烯醛介导ARPE-19细胞损伤模型的建立：当丙烯醛浓度达到50μmol/L时，ARPE-19细胞活性下降；数量开始明显减少，细胞肿胀，坏死，细胞核聚集；总凋亡细胞数为28.91%明显高于空白对照组的4.63%，P＜0.05。因此，50μmol/L丙烯醛浓度可作为ARPE-19细胞损伤模型的最佳浓度。 3、丙烯醛可导致ARPE-19细胞凋亡，而硫辛酸烟酸二联体对此具有拮抗保护作用：对丙烯醛细胞损伤模型而言，当硫辛酸烟酸二联体的预处理浓度达到100μmol/L时，正常细胞率为91.34%；未加入硫辛酸烟酸二联体的单纯丙烯醛组的正常细胞率仅为60.98%。硫辛酸烟酸二联体可以明显减少50μmol/L丙烯醛诱导ARPE-19细胞的凋亡，P＜0.05。50μmol/L丙烯醛+100μmol/L硫辛酸烟酸二联体组的Bax/Bcl-2蛋白比率为0.5558，50μmol/L丙烯醛组仅为1.3892，P＜0.05。由此可见，硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛介导的ARPE-19细胞凋亡具有拮抗保护作用。 4、丙烯醛对大鼠视网膜-脉络膜组织具有损伤作用：空白组及丙烯醛4周组视网膜脉络膜组织结构规整，RPE-Bruch膜连续性完整；丙烯醛8周组视网膜神经上皮层内典型的小丘状隆起，RPE-Bruch膜连续性缺失，似新生血管样组织通过RPE-Bruch膜缺损区进入视网膜神经上皮层内。 结论： 1、丙烯醛通过上调凋亡蛋白Bax的表达，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，激活线粒体凋亡通路，导致视网膜色素上皮细胞的凋亡。 2、新合成药物－硫辛酸烟酸二联体通过诱导抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，抑制凋亡蛋白Bax的激活，阻断线粒体凋亡信号通路，从而拮抗丙烯醛对ARPE-19细胞的损伤作用。 3、丙烯醛可损伤大鼠视网膜-脉络膜组织并诱导类脉络膜新生血管形成。
【关键词】：丙烯醛 视网膜色素上皮 硫辛酸烟酸二联体 凋亡蛋白Bax 抗凋亡蛋白Bcl-2
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-17
• 第一部分 丙烯醛诱导人视网膜色素上皮细胞损伤模型的建立17-32
• 1、引言17
• 2、材料与方法17-25
• 3、结果25-27
• 4、讨论27-32
• 第二部分 硫辛酸烟酸二联体对丙烯醛诱导人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用32-40
• 1、引言32
• 2、材料与方法32-36
• 3、结果36-37
• 4、讨论37-40
• 第三部分 丙烯醛介导大鼠视网膜-脉络膜组织的损伤作用40-45
• 1、引言40
• 2、材料与方法40-42
• 3、结果42-43
• 4、讨论43-45
• 附图45-53
• 全文结论53-54
• 参考文献54-60
• 问题和展望60-61
• 英文缩略词表61-62
• 在校期间发表论文62
• 在校期间获得奖励及参加学术会议62-63
• 致谢63

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