Rapamycin通过抑制内质网应激途径保护光损伤中视网膜感光细胞

发布时间：2017-03-21 17:07

  本文关键词：Rapamycin通过抑制内质网应激途径保护光损伤中视网膜感光细胞，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究mTOR抑制剂Rapamycin保护光损伤中视网膜感光细胞（661w）的分子机制和信号途径。 方法：将661w细胞暴露于2600Lux可见光，用MTT及碘化丙啶（PI）染色法检测细胞活性及细胞死亡率；用DCFH-DA方法检测细胞内活性氧簇(ROS)的变化；应用透射电子显微镜观察内质网的形态变化；通过Western Blot和定量RT-PCR分别在蛋白和mRNA水平检测内质网应激标志物的变化。经过Rapamycin预处理后，利用Western Blot和定量RT-PCR分别从蛋白表达和mRNA转录水平检测mTOR途径下游因子及内质网应激的三条主要信号途径，包括: PERK、IRE1及ATF6通路的变化。此外，还应用经典内质网应激损伤细胞模型（DTT诱导）进一步验证Rapamycin是通过抑制内质网应激途径发挥神经保护作用。 结果：在661w细胞光损伤模型中，光照导致内质网应激反应的三条下游信号通路激活，EIF2a、ATF4、CHOP、IRE1、BIP和ATF6在蛋白质表达和mRNA转录水平明显升高。Rapamycin能明显抑制mTOR的活化及其下游翻译起始因子4EBP1，p-4EBP1，P70，p-P70和磷酸化核糖体蛋白S6激酶（P-S6K）的表达。Rapamycin显著降低光损伤所诱导的内质网应激标志蛋白表达与mRNA转录的上调。此外，，在经典内质网应激损伤细胞模型中，Rapamycin分别在蛋白质和mRNA水平上同样表现出对内质网应激蛋白表达与转录上调的抑制作用。 结论：在光损伤细胞模型中，可见光照射造成661w细胞内质网应激；mTOR抑制剂Rapamycin通过抑制内质网应激途径发挥保护作用；同时在经典内质网应激损伤细胞模型中也证实Rapamycin是通过抑制内质网应激途径对661w细胞发挥保护作用；Rapamycin可能成为治疗视网膜光损伤一种潜在的神经性保护药。
【关键词】：视网膜光损伤 内质网应激 神经保护 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 雷帕霉素(Rapamycin) 感光细胞(661w细胞)
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-6
• 英文缩略词6-8
• 目录8-10
• 第1章 综述10-17
• 1 内质网应激途径10-12
• 2 mTOR 信号通路12-13
• 3 mTOR 抑制剂与 ER stress 的关系13
• 4 展望13-14
• 参考文献14-17
• 第2章 引言17-19
• 第3章 材料和方法19-24
• 3.1 实验材料19-20
• ⑴ 试剂19
• ⑵ 主要仪器和设备19-20
• 3.2 实验方法20-23
• ⑴ 661w 细胞培养20
• ⑵ 光照组及对照组细胞处理方法20
• ⑶ PI 染色20
• ⑷ 活性氧测定20-21
• ⑸ 细胞活性 MTT 实验21
• ⑹ 透射电子显微镜21-22
• ⑺ Western Blot实验22
• ⑻ 实时定量 PCR（Real-time quantitative PCR)22-23
• 3.3 统计学方法23-24
• 第4章 实验结果24-41
• 4.1 Rapamycin 对 mTOR 信号通路的抑制作用24-25
• 4.2 Rapamycin 在 661w 细胞光损伤中的保护作用25-26
• 4.3 光照诱导 661w 细胞产生活性氧26-27
• 4.4 光照诱导 661w 细胞发生内质网应激反应27-30
• 4.5 Rapamycin 在光照诱导内质网应激中具有保护作用30-34
• 4.6 Rapamycin 在 DTT 诱导内质网应激损伤中的保护作用34
• 4.7 DTT 诱导细胞发生内质网应激反应34-38
• 4.8 Rapamycin 抑制 DTT 诱导的细胞内质网应激反应38-41
• 第5章 讨论41-43
• 第6章 结论43-44
• 参考文献44-47
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果47-48
• 致谢48

【共引文献】

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本文编号：259985