应用细菌纤维素膜构建组织工程角膜基质的实验研究

发布时间：2017-03-21 08:08

  本文关键词：应用细菌纤维素膜构建组织工程角膜基质的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的角膜病是主要的致盲眼病之一,进行角膜移植术是最有效的治疗途径,但存在着植片供体不足,移植排斥等问题。组织工程角膜的相关研究为解决角膜移植关于植片供体不足的问题提供了新的途径。本文的研究目的是体外构建组织工程角膜基质,观察角膜上皮细胞和角膜基质细胞在细菌纤维素膜上的生长情况,观察细菌纤维素膜的生物相容性；并通过体内动物实验观察细菌纤维素膜的透明性及生物相容性,为组织工程角膜基质支架材料的选择提供实验依据。方法1、分离兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞进行原代培养,应用CK-3和Vimentin试剂盒进行细胞鉴定并在显微镜下观察其生长情况。2、分别将兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞接种到细菌纤维素膜(BC)上,构建组织工程角膜上皮和组织工程角膜基质,并利用LIVE—DEAD田胞活性毒性检测试剂盒检测细胞活性。3、应用扫描电镜和透射电镜观察兔角膜基质细胞在BC膜上的生长情况,应用扫描电镜观察兔角膜上皮细胞在BC膜上的生长情况,观察BC膜的生物相容性。4、构建兔角膜基质囊袋模型,将BC膜植入囊袋内,对照组仅构建角膜基质囊袋模型。术后1天、1周、1个月、3个月用裂隙灯观察移植情况并拍照。5、术后1周、1个月、3个月取兔角膜,进行病理切片检查,HE染色,检测移植后炎症反应情况。结果1、成功分离培养兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞,细胞鉴定结果为阳性,表明该细胞为角膜上皮细胞和角膜基质细胞。2、细胞活性毒性检测结果显示兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞在BC膜上能够存活,且存活率基本达100%,BC膜无细胞毒性。3、扫描电镜和透射电镜检查的结果表明兔角膜基质细胞在BC膜上生长状态良好,细胞活跃,细胞与BC膜连接紧密,BC膜生物相容性良好,应用扫描电镜检查的结果显示兔角膜上皮细胞在BC膜上生长状态良好。4、成功构建兔角膜基质囊袋模型,裂隙灯观察显示植片透明,无明显炎症反应。5、HE染色结果显示BC膜与周围组织无明显间隔,与周围组织相互融合,无明显炎症细胞浸润。结论体外实验证明兔角膜上皮细胞和兔角膜基质细胞在BC膜上生长状态良好,BC膜无明显细胞毒性,生物相容性良好,体内实验也证明BC膜的生物相容性好,可作为构建组织工程角膜基质的新型生物学材料。
【关键词】：角膜上皮细胞 角膜基质细胞 生物相容性 细菌纤维素膜 组织工程角膜基质
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R779.6
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-15
• 研究现状、成果11-14
• 研究目的、方法14-15
• 1.1 实验动物与材料15-18
• 1.1.1 实验动物15
• 1.1.2 实验所用细菌纤维素膜15-16
• 1.1.3 实验所用的主要仪器和设备16-17
• 1.1.4 实验主要试剂及溶液配制17-18
• 1.2 方法18-23
• 1.2.1 兔角膜上皮细胞和基质细胞分离和原代培养18
• 1.2.2 角膜上皮细胞的鉴定18-19
• 1.2.3 角膜基质细胞的鉴定19-20
• 1.2.4 构建组织工程角膜上皮和组织工程角膜基质基质20
• 1.2.5 细胞活性毒性检测20
• 1.2.6 扫描电镜检测角膜上皮和基质细胞生长情况20-21
• 1.2.7 透射电镜检测21
• 1.2.8 构建兔角膜基质囊袋模型21
• 1.2.9 样本收集及组织病理染色21-23
• 1.3 结果23-30
• 1.3.1 兔角膜上皮细胞培养及鉴定23
• 1.3.2 兔角膜基质细胞培养及鉴定23-24
• 1.3.3 细胞在BC膜上活性毒性检测结果24-26
• 1.3.4 扫描电镜观察上皮细胞和基质细胞检测结果26-27
• 1.3.5 透射电镜检测结果27-28
• 1.3.6 体内实验裂隙灯观察结果28
• 1.3.7 组织病理染色结果28-30
• 1.4 讨论30-37
• 1.4.1 角膜盲的现状以及支架材料研究的现状30-32
• 1.4.2 细菌纤维素膜(BC)的优势32-35
• 1.4.3 不足之处35-37
• 1.5 小结37-38
• 结论38-39
• 参考文献39-46
• 发表论文和参加科研情况说明46-47
• 综述 组织工程角膜上皮种子细胞研究新进展47-57
• 综述参考文献54-57
• 致谢57

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周浩;孙东平;朱春林;许春元;;细菌纤维素吸附人体内毒素的研究[J];纤维素科学与技术;2009年04期

2 袁帅;胡承;曹海鹏;唐德芳;孙苗苗;;响应面法优化细菌纤维素发酵合成工艺[J];时珍国医国药;2010年02期

3 邱竣;周绍龙;柳大烈;;细菌纤维素的研究和应用新进展[J];中国美容医学;2011年05期

4 陆松华;朱昌来;李峰;尤庆生;张天一;;茶水发酵法制备细菌纤维素及其相关性能研究[J];临床医学;2011年11期

5 马霞;陈世文;王瑞明;陆大年;贾士儒;;纳米材料细菌纤维素对大鼠皮肤创伤的促愈作用[J];中国临床康复;2006年37期

6 马霞;张华;陈世文;;生物新材料细菌纤维素与深Ⅱ度烧伤大鼠皮肤的创面愈合(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年34期

7 武志芳;张霞;易彬;沈才洪;胡承;;新型生物材料细菌纤维素的研究进展[J];食品与发酵科技;2010年01期

8 马霞;张华;陈世文;;细菌纤维素膜作为创伤性敷料的可行性(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年12期

9 朱清梅;冯玉红;林强;吴敏;;细菌纤维素/透明质酸复合材料的生物合成及表征[J];纤维素科学与技术;2010年03期

10 郝常明,罗yN;细菌纤维素——一种新兴的生物材料[J];纤维素科学与技术;2002年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 张梦影;冯玉红;;细菌纤维素研究进展[A];2006年全国功能材料学术年会专辑[C];2006年

2 朱宏阳;冯珊;李泳宁;林伟铃;王金海;;细菌纤维素产生菌株的分离及鉴定[A];第十二届全国抗生素学术会议论文集[C];2013年

3 朱艳彬;夏露;李珊;刘振鸿;;新型生物材料细菌纤维素在环境领域中的应用进展[A];2010中国环境科学学会学术年会论文集(第四卷)[C];2010年

4 于长江;尹学琼;吉立;雍国新;林强;;羧甲基细菌纤维素的制备及溶液性质[A];第七届中国功能材料及其应用学术会议论文集（第7分册）[C];2010年

5 王丹;沈新元;;细菌纤维素膜的制备及其性能[A];上海市化学化工学会2007年度学术年会论文摘要集[C];2007年

6 朱平;赵晓霞;王敏;董朝红;;碱溶剂体系下水溶性改性细菌纤维素的制备及表征[A];山东纺织工程学会十二届第二次优秀论文评选获奖论文集[C];2011年

7 杨光;付丽娜;臧珊珊;周平;;基于细菌纤维素的医用功能材料[A];2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C];2011年

8 冯劲;施庆珊;欧阳友生;陈仪本;;2株同属不同种的细菌所产细菌纤维素的分析[A];2012年鄂粤微生物学学术年会——湖北省暨武汉微生物学会成立六十年庆祝大会论文集[C];2012年

9 杨光;;基于细菌纤维素的智能型栓塞材料的制备[A];2013年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——主题I：生物高分子与天然高分子[C];2013年

10 李莹;卿爽;杨光;;细菌纤维素/透明质酸皮肤组织修复材料的制备和评价[A];2013年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——主题H：医用高分子[C];2013年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 范南虹;细菌纤维素凝胶面膜获专利优秀奖[N];中国技术市场报;2010年

2 课题承担单位:荆州文物保护中心;生物化学技术在古代丝织品保护中的应用研究[N];中国文物报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 马霞;发酵生产细菌纤维素及其作为医学材料的应用研究[D];天津科技大学;2004年

2 林德慧;基于细菌纤维素的胞壁模拟物研究[D];西北农林科技大学;2015年

3 赵晓霞;细菌纤维素纤维的制备与性能研究[D];青岛大学;2010年

4 葛含静;细菌纤维素高产菌株高压诱变选育及其机理研究[D];西北农林科技大学;2012年

5 杨亮;细菌纤维素增强复合材料制备、表征及对蛋白药物承载研究[D];东华大学;2013年

6 石帅科;生化合成细菌纤维素及细菌纤维素基磷灰石纳米复合材料的研究[D];东华大学;2009年

7 陈袁曦;材料表面微生物改性及细菌纤维素复合材料的制备与性能研究[D];华东理工大学;2014年

8 卓奇;人脂肪干细胞在纳米细菌纤维素膜上成骨分化的实验研究[D];北京协和医学院;2010年

9 付丽娜;基于细菌纤维素的皮肤组织修复材料的制备和评价[D];华中科技大学;2012年

10 鲁敏;细菌纤维素的制备及其对重金属离子的吸附性能研究[D];东北大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王海波;细菌纤维素耐低温生产菌株的选育及其改性的研究[D];山东轻工业学院;2009年

2 朱明阳;产细菌纤维素菌株选育及细菌纤维素性质研究[D];南京理工大学;2004年

3 毋锐琴;高产细菌纤维素菌株的筛选及发酵工艺优化[D];西北农林科技大学;2008年

4 刘坤;基于细菌纤维素的有序微纳组装[D];华中科技大学;2010年

5 吕瑾;细菌纤维素的分散及其在造纸中的应用研究[D];陕西科技大学;2012年

6 李少慧;细菌纤维素生物合成的调控及其红曲霉菌复合发酵的研究[D];华中科技大学;2012年

7 张雪婷;具有抗菌功能的细菌纤维素/无纺布敷料的制备和性能研究[D];华南理工大学;2015年

8 魏静;细菌纤维素/镧系氧化物纳米纤维的制备及性能研究[D];南京理工大学;2015年

9 王博;细菌纤维素防硬膜外粘连薄膜的研究[D];中国人民解放军医学院;2015年

10 蒋国民;细菌纤维素模板法制备纳米环境材料及其性能研究[D];南京理工大学;2015年

  本文关键词：应用细菌纤维素膜构建组织工程角膜基质的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：259308