犬高危穿透性角膜移植术后排斥反应与TNF-α变化的相关性研究

发布时间：2017-04-09 17:12

  本文关键词：犬高危穿透性角膜移植术后排斥反应与TNF-α变化的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本试验以重庆本地小型杂交犬为试验动物,先构建高危(化学伤)角膜病理模型,而后进行穿透性角膜移植手术,术后观察排斥反应与外周血和角膜组织中TNF-α变化情况。方法：(1)选择健康(无眼疾)本地犬34只作为试验犬,使用1mol/L的NaOH溶液对所有试验犬左眼角膜正中进行碱烧伤,术后每天使用裂隙灯显微镜对术眼观察各层情况并测量新生血管长度。(2)选择17只健康本地犬作为供体犬,对34只碱烧伤模型犬行穿透性角膜移植手术,并严格监控术中、术后的并发症,术后分生理盐水组和(1%RAPA)治疗组分别处置,每天裂隙灯显微镜观察术眼情况并记录。(3)分别取生理盐水组和(1%RAPA)治疗组8只于建立烧伤模型前,手术当日,术后第7、14、21、28、35、42、49、56d采前肢头静脉血,用酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法检测TNF-α浓度；其余18只犬随机分成两组(处置方法同上),分别在术后第7、28、56d各组随机抽取3只取眼,另外选取3只健康犬作为空白对照组,对所取角膜均分三份,一份用于测定犬角膜组织TNF-α含量,一份用于HE染色观察角膜组织病理学变化；最后一份进行荧光定量PCR检测,最后使用△△Ct法分析角膜组织TNF-α基因的相对表达量。试验结果：(1)烧伤当日角膜全层即刻呈现出银白色云雾状,3d后出现不同程度的水肿,混浊度明显加剧,5d后角膜缘开始浸润新生血管并向角膜中心方向生长,7d后炎症加剧,血管向角膜中心弥散,9d左右某些角膜基质层溶解现象加剧,新生血管变得粗大,模型建立成功。(2)所有PKP术犬均无缝线崩裂现象,但有两例在术后3天即发生急性排斥反应需重新补充；生理盐水组术后术犬术眼周围均有大量分泌物分泌,3d时植片均出现轻微水肿,6d时角膜植片植床交界处开始出现明显炎症反应,7d时有部分血管开始长入角膜植片内,15d时所有术犬均出现排斥反应,28d时植片开始出现质感变硬的现象,56d时角膜组织开始肉质化;(1%RAPA)治疗组眼分泌物较之生理盐水组少,3d时植片透明无明显水肿现象,6d时术犬出现新生血管向植片生长的现象,部分犬只角膜出现轻度水肿,7d时新生血管有所增多但仍未到达排斥反应标准,15d时植片的水肿和混浊程度有明显的改善,新生血管出现消退,28d时植片转归透明,56d时除3例排斥外其余角膜植片仍保持透明,未出现排斥反应。(3)碱烧伤后及碱烧伤角膜移植术后早期各组实验犬外周血中TNF-α含量均升高,生理盐水组含量于28d后达最高水平(94.10±1.66pg-ml-1)并在以后的监测期内维持较高含量,治疗组在临床诊断排斥反应发生前术后第14d达最高水平(68.22±0.90pg·ml-1),而后开始下降,到术后56d几乎接近术前正常水平(37.76±1.07pg·ml-1),生理盐水组和治疗组与空白对照组相比差异有统计学意义(P0.01)；碱烧伤角膜移植术后各组(空白对照组除外)实验犬角膜组织中TNF-α含量均升高,在术后28d时治疗组出现峰值(31.99±0.84pg·ml-1)而后下降,生理盐水组含量在术后28d后仍在增长,并在术后56d时达到37.53±0.94pg·ml-1且仍有继续增长的趋势；病理组织学结果显示,术后7d：生理盐水组角膜组织各层细胞出现严重水肿,上皮细胞层有溶解、丢失现象,基质层增厚,内有一定量新生血管生长及红细胞侵润,内皮细胞部分断裂、丢失。治疗组角膜各细胞层有轻微水肿现象,上皮层有所增厚,有少量红细胞侵润,后弹力层和内皮层结构完整。术后28d：生理盐水组角膜组织各层细胞水肿加剧,上皮细胞层开始出现断裂脱离现象,基质层内有大量新生血管生长及红细胞侵润,胶原纤维原有排列被完全打乱,后弹力层与内皮细胞层开始大量脱离和丢失。治疗组术犬角膜各细胞层规则排列,水肿现象明显消退,上皮层完整无丢失,基质层纤维排列较为紧凑均匀,新生血管生长和红细胞侵润现象有所改善,后弹力层和内皮层结构仍保持完整。术后56d：生理盐水组上皮细胞层几乎完全溶解,仅存的细胞也已坏死,红细胞以完全侵润整个基质层,几乎没有内皮细胞存留。治疗组各细胞层组织学结构完全一致,无明显水肿增厚现象,基质层纤维均匀排列,内皮层细胞仅少量缺失。(4)术后角膜中TNF-α基因的含量均有表达且无论是组内或组间在不同时间段角膜TNF-α基因的表达量均呈现出一定的差异性,角膜TNF-α基因在不同时间段表达量与组织中含量的变化一致。 结论：(1)雷帕霉素滴眼液滴眼液对犬高危穿透性角膜移植手术能起到抗免疫排斥反应作用,能够明显抑制新生血管生长,发挥强大的免疫抑制作用。(2) TNF-α浓度变化与裂隙灯显微镜观察和病理组织切片结果一致,外周血TNF-α含量变化有可能与排斥反应有关。(3)外周血TNF-α含量变化与局部术眼角膜组织中TNF-α含量的变化有相关性,而角膜组织中TNF-α含量的变化又与角膜组织中TNF-α mRNA的表达情况有关。
【关键词】：犬 高危穿透性角膜移植 免疫排斥 肿瘤坏死因子-α 雷帕霉素
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R779.65
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 第一章 文献综述10-28
• 1.1 穿透性角膜移植的研究进展10-21
• 1.2 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的研究进展21-25
• 1.3 药物防治角膜移植排斥反应的研究25-28
• 第二章 引言28-30
• 第三章 犬高危穿透性角膜移植术后TNF-α含量变化研究30-46
• 3.1 材料30-33
• 3.2 方法33-38
• 3.3 数据处理与统计分析38
• 3.4 结果38-44
• 3.5 讨论44-45
• 3.6 小结45-46
• 第四章 犬角膜术后病理组织学变化46-54
• 4.1 材料46-47
• 4.2 方法47-48
• 4.3 结果48-51
• 4.4 讨论51-52
• 4.5 小结52-54
• 第五章 犬角膜组织术后TNF-αmRNA表达情况研究54-66
• 5.1 材料54-56
• 5.2 方法56-60
• 5.3 数据处理和统计分析60
• 5.4 试验结果60-64
• 5.5 分析与讨论64-65
• 5.6 小结65-66
• 第六章 全文总结和创新点66-68
• 6.1 全文结论66
• 6.2 创新点66-68
• 参考文献68-74
• 附录1 中英文缩略词表74-75
• 附录2 试验部分图片展示75-76
• 致谢76-77
• 在校期间发表的论文77

【引证文献】

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1 李婧;转化生长因子β1对犬穿透性角膜移植后免疫排斥的影响[D];西南大学;2013年

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本文编号：295726