带FLAG标签的CDK4真核表达载体构建及对喉癌细胞增殖影响

发布时间：2021-05-11 01:03

　　目的在机体生长过程中细胞周期调控起着关键性的作用,而其进程的失衡也会导致肿瘤的发生与发展,cyclin D-CDK4/6-INK4-Rb为细胞周期调控过程中重要通路,其在头颈部鳞癌中改变非常常见,但细胞周期蛋白依赖激酶4（Cyclin-dependent kinase 4,CDK4）作为该通路中关键性因子之一在头颈部鳞癌细胞中具体生物学行为机制仍不明确,需进一步研究,本实验通过构建带Flag标签的pcDNA3.0载体CDK4基因真核表达载体并初步验证该基因对喉癌细胞（Hep-2）的生物学行为影响,为今后进一步研究喉癌细胞发生发展机理奠定前期基础。方法以人乳腺文库为模板通过聚合酶链反应（PCR）技术扩增出CDK4的CDS区序列,采用双酶切技术将扩增出的CDK4序列插入到带Flag标签的pcDNA3.0载体中,将产物进行DH5α感受态细胞转化,获得阳性克隆菌液并提取质粒转染293T细胞,进行基因蛋白表达和基因测序鉴定,待鉴定结果正确,将pcDNA3.0-Flag-CDK4与pcDNA3.0-Flag真核表达载体进行喉癌细胞（Hep-2）转染,经实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测C... 

【文章来源】：锦州医科大学辽宁省

【文章页数】：43 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语表
前言
实验材料与方法
实验结果
讨论
结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
附录
    一 文献综述
        参考文献
    二 在学期间科研成绩
    三 致谢
    四 个人简介



本文编号：3180410