PI3K/Akt及MAPK/ERK通路在下咽癌及嗅母细胞瘤中的作用
发布时间：2021-08-16 12:47
目的:首先研究了 PI3K/Akt及MAPK/ERK信号通路在下咽癌发生发展中的作用,进而探讨两条通路的抑制剂GDC-0980和Refametinib单独与联合用药对下咽癌细胞的抑制作用及分子机理,为PI3K与MAPK抑制剂类新型抗下咽癌药物的开发及应用提供理论依据和初步实验基础。另外,本文分析了嗅神经母细胞瘤临床病例特点,并检测了 PI3K/Akt以及MAPK/ERK信号通路中关键因子Akt、Erk、Stat3和Stat5的磷酸化水平,为阐明嗅神经母细胞瘤的发病机制提供实验基础。方法:1.应用免疫组化方法观察下咽癌组织及癌旁正常组织中Akt和Erk的磷酸化水平,并分析了两者之间、以及两者与下咽癌患者临床病理因素之间的相关性。2.采用MTT实验研究了抑制剂GDC-0980和Refametinib对下咽癌FaDu细胞增殖的影响;利用PI染色法结合流式细胞术分析GDC-0980和Refametinib对FaDu细胞周期的影响;采用Annexin-V-FITC/PI双染结合流式细胞术检测两药诱导凋亡作用;利用Western blot方法检测两药对FaDu细胞周期相关蛋白以及PI3K/Akt和...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１．１下咽癌组织和癌旁正常组织中ｐ－Ａｋｔ和ｐ－Ｅｒｋ的染色情况??［Ａ和Ｂ为下咽癌组织中ｐ－Ａｋｔ的阳性染色（Ａ，?Ｘ?１００；?Ｂ，Ｘ２００），?Ｂ图是Ａ图标记部分的倍??数放大；Ｃ是癌旁正常组织ｐ－Ａｋｔ的染色情况（Ｃ，Ｘ２００）；?Ｄ和Ｅ是下咽癌组织中ｐ－Ｅｒｋ的阳??性染色（Ｄ，?Ｘ?１００；?Ｅ，Ｘ２００），?Ｅ图是Ｄ图标记部分的倍数放大；Ｆ是癌旁正常组织中ｐ－Ｅｒｋ??的染色情况（Ｆ，Ｘ２００）］
图１．２．１?ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞增殖活性的影响??（Ａ．?ＧＤＣ－０９８０对ＦａＤｕ细胞增殖活性的影响。Ｂ．?Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞增殖活性的影??响。）??２．?２．?２?ＧＤＣ－０９８０?和?Ｒｅｆ?ａｍｅｔ?ｉ?ｎ?ｉ?ｂ?对?ＦａＤｕ?细胞周期的影响??以有丝分裂方式增殖的细胞，需要经过Ｇ１期（ＤＮＡ合成前期）、Ｓ期（ＤＮＡ??合成期）、Ｇ２期（ＤＮＡ合成后期）、Ｍ期（有丝分裂期）这么一个周而复始??的动态细胞周期过程，直至子细胞形成作为一次细胞分裂结束的标志，其中Ｇ１??期决定着细胞周期的长短，是控制细胞周期的关键点。细胞周期紊乱是肿瘤发??生的主要机制，因此肿瘤也是一类细胞周期性疾病是越来越多的研宄者达成的??共识，因此，我们使用ＰＩ染色结合流式细胞术分别检测ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ??对ＦａＤｕ细胞周期分布的影响。使用不同浓度梯度ＧＤＣ－０９８０?（０，?０．５，１，５?Ｕ??Ｍ）和?Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ?（０，５，１０，２０?ｉｘＭ）处理?ＦａＤｕ?细胞，药物孵育?４８?ｈ?后，??通过流式细胞术检测细胞周期变化，结果显示，ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ处理??过的细胞均出现了?Ｇ１期阻滞，０．５，１，５?ＵＭ的ＧＤＣ－０９８０处理后的ＦａＤｕ细??
图１．２．２?ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞周期的影响??Ｂ为流式细胞术分析ＧＤＣ－０９８０对ＦａＤｕ细胞周期各时相分布的影响及Ｇｌ、分比统计学分析，Ｃ、Ｄ为流式细胞术分析Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞周期影响及Ｇｌ、Ｓ、Ｇ２／Ｍ期百分比统计学分析。）??ＤＧ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔ?ｉ?ｎ?ｉ?ｂ对ＦａＤｕ细胞周期相关蛋白以及ｍＲＮＡ表达讨ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ诱导细胞周期阻滞的分子机ｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ和Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ定量ＰＣＲ技术，我们又进一步检测了?ＧＤＣ－０９ｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞周期相关蛋白Ｃｙｃｌｉｎ?Ｄｌ，ｐ２７的表达和ｐ－Ｒｂ碟以及对ｐ２７?ｍＲＮＡ表达的影响。实验结果表明，经ＧＤＣ－０９８０处细胞中，ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１的表达水平和ｐ－Ｒｂ的磷酸化水平均呈剂量依赖ｐ２７的蛋白表达水平显著升高（图１．２．３Ａ）。ｑＲＴ－ＰＣＲ检测结果发８０可增加ｐ２７的ｍＲＮＡ表达水平（图１．２．３Ｂ）。同样，Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ
【参考文献】：
期刊论文
[1]下咽癌386例临床特征及疗效分析[J]. 曹轶倓,周梁,吴海涛,李筱明,黄维庭,陈小玲,李采,陶磊. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2016 (06)
[2]小分子靶向抗肿瘤药物的研究进展[J]. 柏静,杨长福,黄高,张明庆,方为民. 肿瘤药学. 2015(03)
[3]口腔颌面部肿瘤中硫酸乙酰肝素酶的研究进展[J]. 陈士文,徐锦程. 蚌埠医学院学报. 2014(06)
[4]头颈部肿瘤暨鼻咽癌的分子靶向临床研究进展[J]. 冯梅,郎锦义. 肿瘤预防与治疗. 2013(01)
[5]Alterations in the human epidermal growth factor receptor 2-phosphatidylinositol 3-kinase-v-Akt pathway in gastric cancer[J]. Yasutaka Sukawa,Hiroyuki Yamamoto,Katsuhiko Nosho,Hiroaki Kunimoto,Hiromu Suzuki,Yasushi Adachi,Mayumi Nakazawa,Takayuki Nobuoka,Mariko Kawayama,Masashi Mikami,Takashi Matsuno,Tadashi Hasegawa,Koichi Hirata,Kohzoh Imai,Yasuhisa Shinomura. World Journal of Gastroenterology. 2012(45)
[6]分子靶向治疗药物的研究进展[J]. 韩慧珍,邹庞,郭宝良. 中国普通外科杂志. 2010(12)
[7]mAb225与放射对舌鳞癌细胞凋亡的研究[J]. 王明国,王中和. 口腔颌面外科杂志. 2010(02)
[8]下咽癌颈部及咽后淋巴结转移的CT/MRI分析[J]. 邓雪英,苏勇,郑列,谢传淼,古模发,曾睿芳,尹韶晗. 癌症. 2010(02)
[9]塞来昔布对鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制的实验研究[J]. 易芳,许新华,付向阳,戴德兰,李道俊,张昌菊. 肿瘤防治研究. 2009(02)
[10]肿瘤分子靶向治疗进展[J]. 王雅杰. 实用肿瘤杂志. 2006(03)
本文编号：3345699
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
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【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１．１下咽癌组织和癌旁正常组织中ｐ－Ａｋｔ和ｐ－Ｅｒｋ的染色情况??［Ａ和Ｂ为下咽癌组织中ｐ－Ａｋｔ的阳性染色（Ａ，?Ｘ?１００；?Ｂ，Ｘ２００），?Ｂ图是Ａ图标记部分的倍??数放大；Ｃ是癌旁正常组织ｐ－Ａｋｔ的染色情况（Ｃ，Ｘ２００）；?Ｄ和Ｅ是下咽癌组织中ｐ－Ｅｒｋ的阳??性染色（Ｄ，?Ｘ?１００；?Ｅ，Ｘ２００），?Ｅ图是Ｄ图标记部分的倍数放大；Ｆ是癌旁正常组织中ｐ－Ｅｒｋ??的染色情况（Ｆ，Ｘ２００）］
图１．２．１?ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞增殖活性的影响??（Ａ．?ＧＤＣ－０９８０对ＦａＤｕ细胞增殖活性的影响。Ｂ．?Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞增殖活性的影??响。）??２．?２．?２?ＧＤＣ－０９８０?和?Ｒｅｆ?ａｍｅｔ?ｉ?ｎ?ｉ?ｂ?对?ＦａＤｕ?细胞周期的影响??以有丝分裂方式增殖的细胞，需要经过Ｇ１期（ＤＮＡ合成前期）、Ｓ期（ＤＮＡ??合成期）、Ｇ２期（ＤＮＡ合成后期）、Ｍ期（有丝分裂期）这么一个周而复始??的动态细胞周期过程，直至子细胞形成作为一次细胞分裂结束的标志，其中Ｇ１??期决定着细胞周期的长短，是控制细胞周期的关键点。细胞周期紊乱是肿瘤发??生的主要机制，因此肿瘤也是一类细胞周期性疾病是越来越多的研宄者达成的??共识，因此，我们使用ＰＩ染色结合流式细胞术分别检测ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ??对ＦａＤｕ细胞周期分布的影响。使用不同浓度梯度ＧＤＣ－０９８０?（０，?０．５，１，５?Ｕ??Ｍ）和?Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ?（０，５，１０，２０?ｉｘＭ）处理?ＦａＤｕ?细胞，药物孵育?４８?ｈ?后，??通过流式细胞术检测细胞周期变化，结果显示，ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ处理??过的细胞均出现了?Ｇ１期阻滞，０．５，１，５?ＵＭ的ＧＤＣ－０９８０处理后的ＦａＤｕ细??
图１．２．２?ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞周期的影响??Ｂ为流式细胞术分析ＧＤＣ－０９８０对ＦａＤｕ细胞周期各时相分布的影响及Ｇｌ、分比统计学分析，Ｃ、Ｄ为流式细胞术分析Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞周期影响及Ｇｌ、Ｓ、Ｇ２／Ｍ期百分比统计学分析。）??ＤＧ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔ?ｉ?ｎ?ｉ?ｂ对ＦａＤｕ细胞周期相关蛋白以及ｍＲＮＡ表达讨ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ诱导细胞周期阻滞的分子机ｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ和Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ定量ＰＣＲ技术，我们又进一步检测了?ＧＤＣ－０９ｅｔｉｎｉｂ对ＦａＤｕ细胞周期相关蛋白Ｃｙｃｌｉｎ?Ｄｌ，ｐ２７的表达和ｐ－Ｒｂ碟以及对ｐ２７?ｍＲＮＡ表达的影响。实验结果表明，经ＧＤＣ－０９８０处细胞中，ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１的表达水平和ｐ－Ｒｂ的磷酸化水平均呈剂量依赖ｐ２７的蛋白表达水平显著升高（图１．２．３Ａ）。ｑＲＴ－ＰＣＲ检测结果发８０可增加ｐ２７的ｍＲＮＡ表达水平（图１．２．３Ｂ）。同样，Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ
【参考文献】：
期刊论文
[1]下咽癌386例临床特征及疗效分析[J]. 曹轶倓,周梁,吴海涛,李筱明,黄维庭,陈小玲,李采,陶磊. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2016 (06)
[2]小分子靶向抗肿瘤药物的研究进展[J]. 柏静,杨长福,黄高,张明庆,方为民. 肿瘤药学. 2015(03)
[3]口腔颌面部肿瘤中硫酸乙酰肝素酶的研究进展[J]. 陈士文,徐锦程. 蚌埠医学院学报. 2014(06)
[4]头颈部肿瘤暨鼻咽癌的分子靶向临床研究进展[J]. 冯梅,郎锦义. 肿瘤预防与治疗. 2013(01)
[5]Alterations in the human epidermal growth factor receptor 2-phosphatidylinositol 3-kinase-v-Akt pathway in gastric cancer[J]. Yasutaka Sukawa,Hiroyuki Yamamoto,Katsuhiko Nosho,Hiroaki Kunimoto,Hiromu Suzuki,Yasushi Adachi,Mayumi Nakazawa,Takayuki Nobuoka,Mariko Kawayama,Masashi Mikami,Takashi Matsuno,Tadashi Hasegawa,Koichi Hirata,Kohzoh Imai,Yasuhisa Shinomura. World Journal of Gastroenterology. 2012(45)
[6]分子靶向治疗药物的研究进展[J]. 韩慧珍,邹庞,郭宝良. 中国普通外科杂志. 2010(12)
[7]mAb225与放射对舌鳞癌细胞凋亡的研究[J]. 王明国,王中和. 口腔颌面外科杂志. 2010(02)
[8]下咽癌颈部及咽后淋巴结转移的CT/MRI分析[J]. 邓雪英,苏勇,郑列,谢传淼,古模发,曾睿芳,尹韶晗. 癌症. 2010(02)
[9]塞来昔布对鼻咽癌CNE-2细胞增殖抑制的实验研究[J]. 易芳,许新华,付向阳,戴德兰,李道俊,张昌菊. 肿瘤防治研究. 2009(02)
[10]肿瘤分子靶向治疗进展[J]. 王雅杰. 实用肿瘤杂志. 2006(03)
本文编号：3345699
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