α-硫辛酸经PI3K/Akt和Nrf2诱导氧化应激下人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶-1

发布时间：2021-10-28 06:14

　　目的观察α-硫辛酸（alpha lipoic acid，ALA）对外源性H2O2对人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶（Heme oxygenase，HO）-1的影响，并探讨其分子机制。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19，并根据不同的实验目的分为6组：（1）空白对照组：仅给予等体积培养基；（2）H2O2干预组：ARPE-19细胞中加入终浓度为12.5mol/L H2O2作用30min；（3）ALA干预组：H2O2作用后加入10～30μmol/L ALA作用4～24h；（4）PI3K抑制剂组：在组3基础上加入25μmol/L LY294002作用30min；（5）siRNA干预组：采用特异性siRNA干扰Nrf2或HO-1表达，随后根部不同研究目的加入H2O2和（或）ALA；（6）CoPP或ZnPP干预组：在组3基础上加入10μmol/L CoPP或ZnPP作用3h。RT-PCR和Western blot分别检测HO-1mRNA和蛋白表达；流式细胞术检测ARPE-19细胞凋亡；荧光探针检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）的产生；Western... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ALA对HO-1mRNA表达的影响

图 1.ALA 对 HO-1 mRNA 表达的影响性对照；3：H2O2；4：10μmol/LALA；5：20μmol/LALA；2O2应激下 ARPE-19 细胞表达 HO-1 蛋白lot 结果与 RT-PCR 类似，H2O2处理 30min 后，HO-着 ALA 浓度的增加，HO-1 的表达水平随之增高。恒定（图 2）。1 2 3 4 5β-aHO00bp00bpHO

图 3.ALA 对 ARPE-19 细胞 Akt 磷酸化的影响2：30μmol/L ALA；3：12.5mol/L H2O2；4：12.5mol/L H2O2+12.5mol/L H2O2+20μmol/L ALA；6：12.5mol/L H2O2+30μmol/L导 H2O2应激下 ARPE-19 细胞 Nrf2 核转位19 细胞未处理时，几乎无 Nrf2 发生核转位。而 30μmol内 Nrf2 含量显著增高。而同时给予 25μmol/L PI3K 抑制胞核内 Nrf2 明显降低，而细胞核蛋白内参 TBP 保持恒1 2 3 4 5 6图 4.ALA 对 ARPE-19 细胞核内 Nrf2 含量的影响TPN

【参考文献】：
期刊论文
[1]内皮细胞和平滑肌细胞氧化应激时Nrf2／ARE信号通路对抗氧化基因表达的调控:与动脉粥样硬化和先兆子痫的关系[J]. Giovanni E．Mann,J（o|¨）rg Niehueser-Saran,Alan Watson,Tetsuro Ishii,Patricia de Winter,Richard C．M．Siow.  生理学报. 2007(02)

博士论文
[1]a-硫辛酸对氧化应激下人视网膜色素上皮细胞的保护作用及机制研究[D]. 李芸.中南大学 2010

硕士论文
[1]氧化应激在年龄相关性黄斑变性中的作用[D]. 范姜砾.第四军医大学 2012
[2]硫辛酸单独或联合VC、VE、Zn对年龄相关性黄斑变性患者血脂及氧化应激水平影响[D]. 杨洪梅.中国医科大学 2010



本文编号：3462392