多巴胺D1受体对RGC-5细胞氧化应激的保护作用及其机理研究

发布时间：2017-05-13 00:03

  本文关键词：多巴胺D1受体对RGC-5细胞氧化应激的保护作用及其机理研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究多巴胺D1受体参与过氧化氢诱导的氧化应激损伤视网膜神经节细胞（Retinal ganglion cell5，RGC-5）的保护分子机制和信号途径。方法：通过逆转录PCR（RT-PCR）和Western blot分别从分子和蛋白水平验证D1受体在RGC-5细胞中表达，，D1序列与T载体连接构建D1受体重组质粒，后经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定确认D1受体基因片段。用H_2O_2诱导氧化应激后，经MTT实验和PI染色分别测定细胞活性及细胞死亡情况。另外，利用Westernbolt测定丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases，MAPKs）家族成员：细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK），蛋白在氧化应激后的表达量及加入D1受体激动剂SKF83959后的蛋白表达改变，以及SKF83959与MAPKs家族蛋白的关系。结果：D1受体在RGC-5细胞中表达，并且D1受体基因序列与小鼠D1受体基因序列完全一致，说明RGC-5细胞株来源于小鼠，而不是大鼠或者人。利用H_2O_2诱导应激后，可以减弱ERK和p38MAPK蛋白的活化，而对JNK蛋白几乎没影响；而SKF83959可以抑制H_2O_2对ERK和p38MAPK蛋白的作用，SKF83959的抑制作用也可以被D1受体拮抗剂SCH23390阻断。SKF83959可以激活ERK和p38MAPK蛋白，而用相应的抑制剂U0126和SB203580可以分别抑制ERK和p38MAPK蛋白的激活，同时阻断SKF83959的细胞保护作用，JNK抑制剂SP600125对SKF83959作用无影响。结论：多巴胺D1受体激动剂SKF83959可以通过活化ERK和p38MAPK信号途径减弱H_2O_2对RGC-5细胞氧化损伤，从而保护视神经细胞，D1受体也可以成为开发视神经保护药的一个分子靶点。
【关键词】：氧化应激 RGC-5 MAPKs SKF83959
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R774
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 综述11-17
• 1.1 D1受体家族及功能11-12
• 1.2 D1受体激动剂和拮抗剂12-13
• 1.3 D1受体介导的信号通路13-15
• 1.4 D1受体保护视神经细胞15-17
• 第二章 引言17-19
• 第三章 材料与方法19-32
• 3.1 实验材料19-21
• 3.1.1 载体19
• 3.1.2 试剂19-20
• 3.1.3 主要仪器和设备20-21
• 3.2 实验方法21-31
• 3.2.1 RGC-5细胞培养21
• 3.2.2 MTT活性测定和PI染色21-22
• 3.2.3 RNA提取和逆转录PCR(RT-PCR)22-24
• 3.2.4 琼脂糖电泳和PCR产物纯化24-25
• 3.2.5 D1受体基因克隆25-26
• 3.2.6 SDS-PAGE电泳和Western blot实验26-31
• 3.3 统计学方法31-32
• 第四章 实验结果32-44
• 4.1 多巴胺D1受体在RGC-5细胞的表达32-33
• 4.2 SKF83959对RGC-5细胞氧化应激的保护作用33-34
• 4.3 SKF83959介导的神经保护与ERK蛋白活化有关34-38
• 4.4 SKF83959介导的神经保护与p38 MAPK蛋白活化有关38-41
• 4.5 JNK与SKF83959介导的神经保护无关41-44
• 第五章 讨论44-48
• 第六章 结论48-49
• 参考文献49-57
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果57-59
• 致谢59

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周舟,王小华,Igisu Hideki,林远,楼淑芬,Matsuoka Masato,程天民,余争平;辐射诱导IEC-6细胞MAPK信号转导途径的激活(英文)[J];辐射研究与辐射工艺学报;2002年02期

2 李宗海;Ras/Raf/MEK/Erk通路调控细胞功能的机制[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2000年01期

3 吴献伟;杨华;吴丽;薛荣亮;;细胞外信号调节激酶蛋白在全脑缺血再灌注损伤后的表达及与凋亡的关系[J];内蒙古中医药;2010年15期

4 沈梅红;李忠仁;项晓人;牛文民;张春兵;;电针对MCAO大鼠ERK蛋白表达的影响[J];针灸临床杂志;2007年07期

5 吴献伟;吴丽;薛荣亮;;全脑缺血再灌注后磷酸化ERK蛋白的表达及应用PD98059后对其表达的影响[J];实用医技杂志;2008年02期

6 盛宏申,黄维国,王锦铃,姜鸿彦,邱建华;庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮自发修复的分子机制研究[J];中国临床康复;2002年09期

7 郭松;王建超;王芳;;TGF-β和ERK在骨质疏松大鼠骨组织中的表达[J];中国康复;2007年05期

8 张莹;孙黎光;叶丽平;曹师承;王玉;;铅对大鼠神经胶质培养细胞ERK活力及总量的影响[J];毒理学杂志;2007年05期

9 马俊骥;姜慧卿;李芳芳;崔东来;刘丽;扈彩霞;张杰英;;RKIP在胆总管结扎肝纤维化大鼠肝脏组织的表达[J];中国老年学杂志;2008年20期

10 钟华;何芳;胡清华;王振焕;邓峰美;孙志萍;李增春;;血管平滑肌细胞中ERK通路与TGF-β_1/Smad通路的相互作用[J];中国应用生理学杂志;2010年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 李小林;朱利平;易砖;徐又一;;以聚多巴胺为分离层的复合纳滤膜制备与表征[A];第七届中国功能材料及其应用学术会议论文集（第6分册）[C];2010年

2 周妙妮;许文;付丽芳;洪为松;关翠萍;许爱娥;;HU16培养基对表皮黑素细胞ERK1/2信号通路的激活[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年

3 梁正贤;刘娜;刘丽梅;柳思佳;雍彦礼;孙伟正;;补肾生血法对慢性再生障碍性贫血患者骨髓ERK号通路相关蛋白表达的影响[A];全国中西医结合血液学学术会议论文汇编[C];2010年

4 Michelle C.Mendoza;Sarah J.Mahoney;Didem Ilter;John Blenis;;Down-regulation of CMTM8 induces EMT-like changes and cell motility through c-MET-ERK signaling[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

5 金龙腾;张和;李昌崇;张维溪;林立;;ERK信号通路在白介素-1β介导人胚肺成纤维细胞增殖和活化中的作用及香菇多糖的调控[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年

6 王新华;王士雯;周荣斌;李泱;李宗斌;赵玉生;朱庆磊;刘昱圻;;地黄低聚糖对体外培养的骨髓间充质干细胞增殖和ERK表达的影响[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年

7 王俊英;刘俊岭;陈淑萍;乔丽娜;高永辉;;电针镇痛与海马、下丘脑ERK信号通路的关系的研究[A];第十五届针灸对机体功能的调节机制及针灸临床独特经验研讨会暨第十一届针灸经络学术研讨会会议论文集[C];2010年

8 贾妍;徐长磊;徐群渊;;帕金森病动物模型中谷氨酸突触活动对多巴胺能神经纤维再生的影响[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

9 凌晴舟;孟程博;吴胜男;邢达;;利用FRET技术实时监测弱激光刺激下ERK和FoxM1的相互作用[A];中国光学学会2011年学术大会摘要集[C];2011年

10 冯杰;张英杰;吴胜男;邢达;;低功率激光照射通过激活ERK/Sp1信号通路促进血管再生[A];中国光学学会2011年学术大会摘要集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 本报记者 严曼青;百年老企御险有方 SKF认定机遇即在中国[N];机电商报;2009年

2 本报记者 严曼青;马格森:中国是现在SKF投资最多的国家[N];机电商报;2010年

3 本报记者 严曼青;德国SKF为中国机床提供全套解决方案[N];中国工业报;2011年

4 本报记者 何弦;行业不同 挑战各异[N];机电商报;2011年

5 忻庭良;真诚服务用户是我们的最大追求[N];中国机电日报;2001年

6 本报记者 严曼青;携手共创绿色家园 SKF在华启动为期五年的森林种植项目[N];机电商报;2010年

7 ;SKF应用于连铸的最新解决方案[N];世界金属导报;2011年

8 张程鹏;石钢轴承钢产品成功打入SKF集团[N];世界金属导报;2011年

9 通讯员 谌启程 张翠娟;福厦铁路D1标段电力通信信号工程完工[N];中国铁道建筑报;2009年

10 记者 郑鸿;斯凯孚大连二期工程竣工投产[N];大连日报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 刘密;艾灸促进应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜修复作用及其ERK信号转导途径的研究[D];湖南中医药大学;2011年

2 李文毅;Rap1GAP通过ERK和Akt途径抑制内皮细胞增殖、迁移的实验研究[D];华中科技大学;2011年

3 王海涛;PTSD大鼠海马和下丘脑5-HT1A受体活性及前额皮质ERK变化的实验研究[D];中国医科大学;2010年

4 李印;nm23-H1基因转染对人肺癌细胞中Ras-to-MAPK信号传导通路影响的实验研究[D];四川大学;2004年

5 叶晓峰;ERK1/2信号通路调控糖尿病视网膜Muller细胞分泌血管内皮生长因子的作用研究[D];复旦大学;2009年

6 郑旭锐;“肺病及肠”病理变化及相关调控物质和ERK信号通路研究[D];成都中医药大学;2011年

7 王秋旭;口腔鳞状细胞癌细胞外信号调节激酶及PTEN蛋白表达的研究[D];中国医科大学;2005年

8 刘燕;MEK/ERK信号传导通路在缺氧诱导的外层血—视网膜屏障损伤中的作用[D];中南大学;2012年

9 赵黎;HIF-1α/ERK通路在微波辐射致海马神经元线粒体损伤中的作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年

10 关晓伟;ERK1/2及CRF系统在可卡因成瘾过程中的作用及其机制研究[D];南京医科大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 李铤;多巴胺D1受体对RGC-5细胞氧化应激的保护作用及其机理研究[D];吉林大学;2013年

2 赵萌;ERK表达及活化在食管癌进展过程中的作用机制研究[D];河北医科大学;2010年

3 刘清南;Adipophilin通过ERK1/2-PPARγ途径促进细胞内脂质蓄积[D];南华大学;2010年

4 许清秀;ERK通路与丙泊酚后处理大鼠的脑保护作用[D];福建医科大学;2011年

5 黄

本文编号：361119